应用RNA干扰技术对旋毛虫蛋白酶体β7亚基基因功能的研究

发布时间：2017-06-15 21:13

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【摘要】：目的研究旋毛虫蛋白酶体β7亚基(T.spiralis proteasome subunit beta type-7,Tspst)的基因功能。方法通过浸泡法将Tspst特异性的dsRNA(dsRNA-Tspst)导入旋毛虫肌幼虫体内,应用Real-time PCR和Western blot检测经dsRNA-Tspst浸泡处理后幼虫Tspst基因的转录和表达水平。体外培养观察Tspst基因沉默对幼虫存活的影响。将dsRNA浸泡后的幼虫经口接种小鼠,观察Tspst基因沉默对幼虫发育、存活及雌成虫生殖力的影响。结果Realtime PCR和Western blot检测显示,旋毛虫幼虫经40ng/μl dsRNA浸泡处理后Tspst基因的转录和表达分别下降71.87%和61.9%(P0.05)。dsRNA浸泡处理组、Lip2000和PBS对照组幼虫的死亡率分别是33.4%、35%和35.4%(χ2=0.118,P0.05)。将dsRNA浸泡的幼虫接种小鼠后6d,肠道成虫与35d肌幼虫的减虫率分别为26.51%和38.34%。dsRNA浸泡处理组、Lip2000和PBS对照组幼虫感染小鼠收集的雌虫体外培养72h新生幼虫产量分别是53.26±3.99、50.80±3.08和53.70±2.57条(P0.05)。结论 dsRNA可明显抑制Tspst基因的表达及幼虫在小鼠体内的发育和存活。
【作者单位】： 郑州大学医学院寄生虫学教研室;
【关键词】： 旋毛虫 蛋白酶体β亚基 RNA干扰 dsRNA
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81271860,81471981) 高校博士点专项科研基金项目(No.20124101110005)
【分类号】：R383.15
【正文快照】： ***significantly inhibited the expression of Tspst in T.spiralis and it inhibited larval development and survival in mice.RNA干扰(RNA interference,RNAi)最早在秀丽隐杆线虫中被发现和证实[1]。RNAi是真核生物体内一种由双链RNA(Double-stranded RNA,dsRNA)介导的

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