犬贾第鞭毛虫PDI-4基因的表达及定位

发布时间：2017-06-18 17:03

  本文关键词：犬贾第鞭毛虫PDI-4基因的表达及定位，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的克隆、表达二硫键异构酶4基因,并研究其在犬贾第鞭毛虫滋养体中的定位。方法根据GenBank登陆的贾第鞭毛虫二硫键异构酶4基因(gPDI-4)(登录号XM_001710176)序列,通过分析序列,设计合成一对gPDI-4引物。以犬贾第鞭毛虫滋养体总RNA为模板,采用反转录PCR的方法扩增PDI-4基因并克隆至pMD-18T载体,构建pMD-gPDI-4载体,再把目的基因亚克隆至pET-28a载体,构建表达载体pET-gPDI-4,转化入大肠埃希菌表达菌DE3中,经IPTG诱导后用SDS-PAGE分析表达情况。同时用组氨酸(His)结合树脂柱纯化PDI-4蛋白。用纯化的PDI-4蛋白免疫小鼠,之后收集血清作为一抗,通过免疫荧光法检测PDI-4在贾第鞭毛虫滋养体中的定位。结果反转录PCR(RT-PCR)扩增出大小为1 065bp的PDI-4基因,构建的pET-gPDI-4能高效表达gPDI-4蛋白,SDS-PAGE显示表达蛋白分子质量为36ku。免疫荧光试验显示贾第鞭毛虫PDI-4蛋白除定位于细胞表面、内质网和腹部吸盘外,主要存在于腹部鞭毛。结论成功克隆、表达了犬贾第鞭毛虫PDI-4基因,并确定其主要在腹鞭毛表达。
【作者单位】： 吉林大学动物医学学院;
【关键词】： 犬贾第鞭毛虫 蛋白二硫键异构酶 滋养体 免疫荧光定位 腹鞭毛
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31101804,30970322)
【分类号】：R383.14
【正文快照】： ***贾第鞭毛虫是一种原生动物,能感染人类和其他哺乳动物,导致肠道疾病-贾第鞭毛虫病[1,2]。在一个生命周期中,贾第鞭毛虫分滋养体和包囊两种形式存在。滋养体具有复制和能动性,定殖于宿主的十二指肠,而包囊有一个致密的蜂窝壁,在外界具有较强的抵抗能力,且具有传染性。目前关

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本文编号：460094