Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能

发布时间：2017-06-19 08:08

  本文关键词：Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建Treg(regulatory T cell)细胞关键转录因子Foxp3逆转录病毒表达载体,并将其转染和稳定表达于Treg细胞中,检测Treg细胞因子改变。方法设计编码区全长序列引物,Hi Fi PCR(high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)扩增编码区序列。胶回收PCR产物,将PCR产物与线性化p SCV-Bsd RFP质粒连接并测序鉴定。将p SCV-Bsd RFP质粒电转入骨架质粒BJ5183,将其转染293病毒包装细胞体系,包装病毒。反复感染4次得到高滴度p SCV-Bsd RFP-Foxp3逆转录病毒液。将此高表达逆转录病毒命名为p SCV-Bsd RFP-Foxp3,感染大鼠脾脏来源Treg细胞,G418筛选稳定表达细胞株。ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)检测Treg细胞因子IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改变。结果 Hi Fi PCR得到编码区全长序列DNA,连接到p SCV-Bsd RFP质粒,测序鉴定扩增序列符合编码区序列。p SCV-Bsd RFP质粒成功转染BJ5183后,转染293病毒包装体系,可见感染细胞有红色荧光表达。p SCV-Bsd RFP-Foxp3病毒感染Treg细胞稳定表达后,可见细胞内红色荧光表达。IL-10和TGF-β表达增强。结论成功构建Foxp3高表达逆转录病毒p SCV-Bsd RFP-Foxp3,转染大鼠脾脏来源Treg细胞并得到稳定高表达Foxp3的Treg细胞。p SCV-Bsd RFP-Foxp3可增强Treg细胞分泌IL-10和TGF-β功能。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科;
【关键词】： 逆转录病毒 Foxp 质粒 Treg
【基金】：博士点新教师基金(20115503120012) 重庆市卫计委基金(2011-2-103) 重庆市教委基金(KJ1500207)
【分类号】：R392
【正文快照】： Foxp3是Treg细胞的关键转录因子,Treg细胞发挥免疫调控的作用需要通过转录因子Treg细胞进行,因此调控Foxp3的表达是否可以调控Treg细胞在免疫调控中的作用值得我们研究和探索,本文构建了Foxp3高表达逆转录病毒载体,并将其转染、稳定表达于Treg细胞中,检测p SCV-Bsd RFP-Foxp3

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本文编号：461877