猪骨髓极小胚胎样干细胞的分离、鉴定及生物学特性探究

发布时间：2017-06-19 13:15

  本文关键词：猪骨髓极小胚胎样干细胞的分离、鉴定及生物学特性探究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 建立猪骨髓极小胚胎样干细胞(very small embryonic-like stem cells,VSELs)的体外分离与扩增方法,探索优化分选VSELs的流程,提高分选效率,明确VSELs的生物学特性,为干细胞转化医学奠定坚实的基础。 方法： 分别采用Ficoll淋巴细胞分离液及红细胞裂解液从猪骨髓中分离单个核细胞,运用相关特异性荧光标记抗体CD45, Lin及CXCR4进行标记,流式细胞仪分选猪骨髓VSELs,并比较两种方法的优劣,对细胞表型及VSELs获得量进行统计学分析。优化分选：将红细胞裂解液处理获得的猪骨髓单个核细胞用特异性抗体CD45标记,再次标记磁珠后用免疫磁珠分选器阴选,阴选后的细胞体外条件培养扩增,收集培养扩增的细胞进一步标记荧光标记抗体Lin及CXCR4,进入流式分选获得VSELs,进而在条件培养基中扩增培养,光学显微镜下观察细胞形态特征并绘制细胞生长曲线图,透射电镜下观察VSELs的超微结构特征,并采用免疫荧光染色和碱性磷酸酶染色的方法鉴定多潜能干细胞标志的表达。同时将猪骨髓单个核细胞进行体外培养扩增,光学显微镜下观察细胞形态特征并绘制细胞生长曲线图。 结果： 猪骨髓VSELs约占骨髓单个核细胞的的0.03%-0.06%,经红细胞裂解液处理后流式分选获得VSELs数量优于Ficoll淋巴细胞分离液处理,采用优化分选的方法,可从猪骨髓中分离到更多贴壁生长的VSELs,与骨髓间充质干细胞相比,这些细胞体积小、形态均一,体外不易扩增,透射电镜下观察可见VSELs细胞核大,以常染色质为主,细胞质少,核质比高,细胞器少,且能够表达多潜能抗原标志SSEA-1、Oct-4、Nanog和Sox-2,同时碱性磷酸酶染色阳性,猪骨髓单个核细胞体外培养扩增获得骨髓间充质干细胞。 结论： 猪骨髓中存在VSELs,在体外很难扩增,可能为猪骨髓MSCs前体细胞,这种细胞具有胚胎干细胞(embryonic-like stem cells, ESCs)的生物学特性,能够表达ESCs特异性抗原标志。因此,极小胚胎样干细胞有望成为干细胞研究和再生医学理想的种子细胞。
【关键词】：极小胚胎样干细胞 骨髓 猪 分离培养
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 附件3-4
• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 符号说明9-11
• 前言11-13
• 1. 材料与方法13-20
• 2. 结果20-22
• 3. 讨论22-26
• 4. 结论26-28
• 附图表28-37
• 参考文献37-42
• 综述42-51
• 参考文献47-51
• 致谢51-53
• 硕士在读期间发表文章53-54

【参考文献】

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1 耿珊;张琛;刘俊;刘典锋;周s

本文编号：462626