大鼠TBI原位植入带有GFP的BMSCs后可向神经元分化，脑内GDNF浓度增加

发布时间：2017-06-20 03:03

  本文关键词：大鼠TBI原位植入带有GFP的BMSCs后可向神经元分化，脑内GDNF浓度增加，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的在创伤性脑损伤(TBI)后1w原位移植同种骨髓基质细胞(BMSCs),观察移植后1w,2w局部GDNF浓度与细胞向神经元分化有无相关性,探究临床细胞移植治疗脑损伤的可能机制。 方法1,采用Feeney自由落体方法制作大鼠中度外伤性脑损伤模型(重量10g,高度20cm),HE染色鉴定损伤程度。2.体外采用全骨髓贴壁培养法培养大鼠BMSCs,细胞传三代后用携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒转染BMSCs进行标记,流式细胞仪检测标记GFP的细胞比例。3.将GFP标记的BMSCs (GFP-BMSCs)原位(损伤区)植入损伤模型大鼠后观察细胞存活状态,并分别于植入GFP-BMSCs后1w、2w、3w处死大鼠行脑组织切片,荧光显微镜下观测表达GFP的细胞。4.将体外转染GFP1w后的BMSCs(2×106个细胞)原位植入脑损伤模型建立后1w大鼠脑内,在植入GFP-BMSCs后1w、2w两个时间点处死大鼠,部分鼠取伤侧脑组织行ELISA法检测GDNF的表达；部分鼠固定、取脑、切片,损伤区细胞行神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫双标染色,激光共聚焦显微镜下计数GFP-NSE双标记阳性细胞数。比较各时点生理盐水组、细胞移植组的双标记阳性细胞计数与相应的GDNF浓度间有无相关关系。 结果1.采用Feeney自由落体打击制作大鼠中度外伤性脑损伤模型(重量10g,高度20cm)稳定可靠。2. BMSCs在初代培养时5-7天后出现增殖,贴壁法可纯化BMSCs,慢病毒可稳定转染BMSCs,平均感染率为95%。3.GFP-BMSCs移植入鼠脑后能够存活,3w时仍可见到表达GFP的细胞。4.脑损伤1w后原位植入GFP-BMSCs,发现在伤后1w、2w组中植入的细胞都可分化为GFP-NSE的双阳性细胞,只是数量较少,同时可以增加GDNF的表达,但是GFP-NSE的阳性细胞数量与GDNF浓度间无相关关系。 结论在脑损伤后原位移植骨髓基质细胞可分化为神经元,脑中GDNF表达增加,但是二者之间无相关关系。
【关键词】：创伤性脑损伤 骨髓基质细胞 细胞分化 GDNF 细胞移植
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 1 序言10-13
• 2 材料与方法13-19
• 2.1 材料13
• 2.2 试剂13
• 2.3 主要仪器13-14
• 2.4 方法14-19
• 2.4.1 大鼠中度颅脑损伤模型的建立14-15
• 2.4.2 HE染色15-16
• 2.4.3 BMSCs的体外培养16
• 2.4.4 BMSCs慢病毒转染GFP基因16
• 2.4.5 动物分组16-17
• 2.4.6 大鼠脑内原位细胞移植17
• 2.4.7 ELISA法检测GDNF的表达17-18
• 2.4.8 免疫双标法检测移植细胞GFP-NSE的表达18-19
• 2.4.9 统计学处理19
• 3 结果19-27
• 3.1 脑损伤后实验动物的一般表现19
• 3.2 病理形态学改变19-21
• 3.2.1 大体病理学改变19-20
• 3.2.2 苏木精-伊红染色组织病理学改变20-21
• 3.3 BMSCs的培养、传代21-22
• 3.4 慢病毒载体介导GFP转染BMSCs22-24
• 3.5 移植细胞在脑内的存活24-25
• 3.6 ELISA检测GDNF的表达25
• 3.7 免疫双标组织化学染色检测NSE的表达25-26
• 3.8 统计分析26-27
• 4 讨论27-32
• 4.1 BMSCs的生物学特性27-29
• 4.2 BMSCs的GFP基因慢病毒载体转染29-30
• 4.3 BMSCs移植与损伤区脑内分化30-32
• 5 参考文献32-36
• 6 文献综述36-40
• 参考文献38-40
• 7 附录40-41
• 8 致谢41-42
• 9 在读硕士其间发表论文情况42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 徐强;徐如祥;姜晓丹;潘力;陈剑荣;蔡颖谦;张世忠;;恒河猴骨髓基质细胞向成熟神经细胞分化的实验研究[J];中华神经医学杂志;2006年05期

2 李云玲,陈笛,王璐,江和碧,卓本慧,梁熙,李廷玉;成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的体外研究[J];第三军医大学学报;2003年11期

3 宋扬;韩一生;毕龙;王树森;张振宇;侯巍;黄兆松;;创伤性脑损伤大鼠动物模型及其评价体系的建立[J];中华神经外科疾病研究杂志;2009年06期

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本文编号：464372