基于重组慢病毒的新型HBV表型分析系统

发布时间：2017-06-21 07:01

  本文关键词：基于重组慢病毒的新型HBV表型分析系统，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：以慢病毒系统为基础，结合HBV聚合酶反式互补技术建立一种全新的HBV体外表型分析系统。 方法： 1.将HBV pol克隆到慢病毒载体pLenti-mcs，得到重组质粒pLenti-pol，重组质粒pLenti-pol与三种慢病毒包装质粒共转染293FT细胞，产生HBV pol重组慢病毒，命名为Lenti-pol； 2.构建pol基因表达缺失的HBV1.1倍体质粒，，将其转染至HEK293细胞中，经过两个月的G418筛选，获得pol基因表达缺失的HBV1.1倍体稳定细胞系，命名为HBV P-293； 3.利用反式互补，将重组慢病毒Lenti-pol导入到稳定细胞系HBVP-293中，经过10天杀稻瘟菌素(blasticidin)筛选之后，对获得的细胞293HBV P-+P进行HBV复制鉴定； 4.利用293HBV P-+P细胞，进行野生型HBV药物敏感性分析实验； 5.构建系列含有RT典型耐药突变的HBV pol重组慢病毒，通过反式互补，获得可复制这些突变病毒的细胞系。 结果： 1. HBV pol重组慢病毒构建成功； 2.成功构建pol基因表达缺失的HBV1.1倍体稳定细胞系； 3.将重组慢病毒Lenti-pol导入到稳定细胞系HBV P-293中，HBVP-293能够复制HBV DNA； 4.成功构建一系列含有RT典型耐药突变的HBV pol重组慢病毒,分别导入HBV P-293中，获得相应突变病毒复制细胞系。 结论：成功构建了一种基于重组慢病毒的新型HBV表型分析系统，该系统将有助于更有效地进行HBV体外表型分析。
【关键词】：慢病毒 聚合酶基因 耐药 表型分析
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.21
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-35
• 2 结果35-51
• 3 讨论51-53
• 全文总结53
• 本课题创新点53-54
• 参考文献54-56
• 文献综述56-66
• 参考文献63-66
• 致谢66-67
• 攻读学位期间撰写和发表的论文67-68
• 攻读学位期间参加的会议68-69

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 常静霞;汪茂荣;;乙型肝炎病毒基因耐药变异研究进展[J];实用肝脏病杂志;2013年05期

2 宋闽宁;黄文琪;闵峰;;核苷和核苷酸类药物治疗慢性乙型肝炎产生多重耐药的挽救治疗观察[J];临床肝胆病杂志;2013年08期

3 李平;骆抗先;何海棠;汪茂荣;常静霞;;乙型肝炎病毒rtA181变异的临床特点分析[J];南京医科大学学报(自然科学版);2013年09期

4 陈成伟;陈从新;陈士俊;陈永平;成军;程明亮;窦晓光;段钟平;高志良;侯金林;贾继东;江家骥;李杰;李兰娟;李彤;鲁凤民;茅益民;缪晓辉;宁琴;牛俊奇;任红;斯崇文;孙永涛;谭德明;唐红;唐小平;万谟彬;王德扬;王贵强;王豪;王慧芬;王宇明;魏来;翁心华;谢青;杨益大;尤红;张玲霞;张文宏;张欣欣;庄辉;;核苷和核苷酸类药物治疗慢性乙型肝炎的耐药及其管理[J];慢性病学杂志;2013年02期

5 Francisco Rodriguez-Frias;Maria Buti;David Tabernero;Maria Homs;;Quasispecies structure,cornerstone of hepatitis B virus infection: Mass sequencing approach[J];World Journal of Gastroenterology;2013年41期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 李平;乙型肝炎病毒逆转录酶区A181T/V变异的相关研究[D];南方医科大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 王琳;我国流行C基因型野生和耐药HBV稳定复制细胞系的建立及应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年

2 王晓英;慢乙肝患者HBVcccDNA与血清HBVDNA及其标志物相关性研究[D];宁夏医科大学;2013年

3 邓孝林;乙型肝炎病毒准种在恩替卡韦补救治疗中的动态演变[D];重庆医科大学;2013年

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本文编号：467861