新西兰兔心衰心气虚证模型的建立及其基因芯片数据分析

发布时间：2017-06-22 02:05

  本文关键词：新西兰兔心衰心气虚证模型的建立及其基因芯片数据分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：心气虚证是心血管疾病最常见的证型之一,心气虚主要是由于心脏功能低下进而引起的全身机能活动的衰退。心气虚是心衰病患中最常见和最早出现的证候,几乎所有的心衰患者都有不同程度的心气虚表现。心气虚被认为是心力衰竭发病的始动因素和关键环节。心气虚实质的现代研究已为众多研究者所重视,因此建立理想的心衰心气虚证病证结合动物模型,可为心衰心气虚证诊断的客观化、标准化研究打下了良好的基础。 目的：本研究采用主动脉瓣关闭不全法诱导新西兰兔容量超负荷型心力衰竭,经过一段时间饲养,结合中医心气虚证的特点进行评价,建立病证结合的心衰心气虚证实验动物模型,并检测其相关指标的变化情况,利用基因芯片技术分析其基因表达的变化。 方法： (1)建立超容量负荷型心衰模型：运用导管术造成新西兰兔主动脉瓣膜关闭不全,制作超容量负荷型心衰模型。造模前后分别利用RM-6000四道生理记录仪观察动物血流动力学指标：主动脉收缩压(SBP)、主动脉舒张压(DBP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVDP)、左室最大上升速率(LV+dp/dt)、最大变化速率(LV±dp/dt),以LV±dp/dtmax下降40%以上,LVDP上升40%以上,或LV±dp/dtmax下降达不到40%时,DBP下降40%以上为心衰成功标准。 (2)一般评价指标观察：造模后将动物分为模型15d组、模型30d组和正常对照组。量化观察各组动物的毛色、精神状态、活动情况、饲料消耗指数、体重增加指数、心率、呼吸频率等指标,结合中医心气虚证的特点对该模型进行评价。 (3)心电图及心肌形态学的研究：利用心电图仪记录各组动物心电图,记录各组动物心率变化情况,分析模型组动物心电图改变情况；通过病理切片观察模型组动物心肌形态学变化情况。 (4)血清SOD、MDA、 cAMP、 cGMP检测：利用生化试剂盒检测血清SOD活力和MDA含量,判断模型组动物机体抗氧化能力；利用酶联免疫法检测血清中cAMP、 cGMP的变化情况。 (5)利用基因芯片技术分析基因表达的变化：利用Agilent兔4×44K全基因表达谱芯片分析心衰模型心气虚新西兰兔的基因表达差异。 结果： (1)造模后动物SBP、DBP和LVSP血流动力学指标显著性下降,LVDP显著上升LV+dp/dt和LV±dp/dt血流动力学指标明显下降。其中SBP、DBP、LVSP、 LVDP、 LV+dp/dt、-dp/dt、 LV±dp/dt的变化率分别为33.26%、39.65%、30.33%、279.35%、41.32%、46.02%、43.50%,造模成功。 (2)造模15天后,模型组兔与正常对照组比较,毛发枯槁,活动有所减少,进食减少,反应迟钝,精神萎靡,抓起时反抗减轻,造模30d兔毛发枯槁、发黄,活动明显减少,精神萎靡加重,抓起反抗不明显。模型组动物呼吸频率加快,且随造模时间的推移,呼吸次数有加快的趋势。 (3)模型15d组和模型30d组心电图出现了QRS波群异常和ST段抬高；与正常15d组比较,模型15d组和模型30d组兔心率显著加快。 (4)模型组兔血清SOD活性明显低于正常对照组,血清MDA含量明显高于正常对照组；模型组兔血清cAMP明显低于正常对照组,cGMP明显高于正常对照组。 (5)利用基因芯片共检测出665个差异基因,与人的基因序列比对,得到16个功能明确的基因,其中与心功能较密切相关的基因主要与离子通道、肌收缩、信号转导等功能有关。 结论： 采用主动脉瓣关闭不全法建立心衰兔模型方法可靠。主动脉关闭不全,造成心脏前负荷增加,使左心室舒张末期容积增加,最终导致左心室扩大肥厚及心力衰竭。通过对模型动物的各项指标进行检测,并结合中医学心气虚证的特点进行评价,该方法成功复制了心衰心气虚证新西兰兔模型。心肌组织基因芯片检测结果显示,该模型基因表达出现了一定的变化,验证了该模型存在基因表达水平的改变,筛选出的相关基因具有一定的可靠性,并为后续的研究打下良好的基础。
【关键词】：心气虚 心衰 病证结合动物模型 基因芯片 新西兰兔
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R259;R-332
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 目录8-10
• 引言10-12
• 第一部分 文献研究12-26
• 1.1 心气虚证的临床研究进展12-16
• 1.1.1 心气虚证脉象分析研究12-13
• 1.1.2 心气虚与心功能的关系13-14
• 1.1.3 心气虚证与心电图的关系14
• 1.1.4 影像学检测对心气虚证的诊断14-15
• 1.1.5 其他15-16
• 1.2 心气虚证实验研究16-19
• 1.2.1 心钠素和B型脑钠肽与心气虚的联系16
• 1.2.2 免疫学与心气虚的关系16-17
• 1.2.3 自由基损伤和机体抗氧化能力与心气虚的关系17
• 1.2.4 肿瘤坏死因子及白细胞介素与心气虚的关系17
• 1.2.5 肾素-血管紧张素-醛固酮系统与心气虚的关系17-18
• 1.2.6 甲状腺激素和促甲状腺激素与心气虚的联系18
• 1.2.7 心气虚证与血管活性物质18
• 1.2.8 其他18-19
• 1.3 心气虚证动物模型的研究概况19-22
• 1.3.1 心气虚证动物模型的造模方法19-21
• 1.3.2 心气虚证动物模型客观评价体系21-22
• 1.4 基因芯片技术在中医心血管疾病研究中的应用22-24
• 1.5 小结24-26
• 第二部分 心衰心气虚证新西兰兔模型的建立及评价26-48
• 2.1 心衰心气虚证新西兰兔模型的建立26-29
• 2.1.1 实验材料26
• 2.1.2 实验方法26-27
• 2.1.3 实验结果27-28
• 2.1.4 讨论28-29
• 2.2 一般评价指标观察29-33
• 2.2.1 实验材料29-30
• 2.2.2 实验方法30
• 2.2.3 实验结果30-32
• 2.2.4 讨论32-33
• 2.3 心电图及心肌形态学的研究33-36
• 2.3.1 实验材料33
• 2.3.2 实验方法33-34
• 2.3.3 实验结果34-36
• 2.3.4 讨论36
• 2.4 心衰心气虚证兔模型血清SOD、MDA测定36-40
• 2.4.1 实验材料36-37
• 2.4.2 实验方法37-38
• 2.4.3 实验结果38-40
• 2.4.4 讨论40
• 2.5 心衰心气虚证兔模型血清cAMP、cGMP的变化40-45
• 2.5.1 实验材料40-41
• 2.5.2 实验方法41-42
• 2.5.3 实验结果42-45
• 2.5.4 讨论45
• 2.6 小结45-48
• 第三部分 心衰心气虚证兔模型基因芯片数据分析48-57
• 3.1 实验材料48
• 3.2 实验方法48-52
• 3.3 实验结果52-54
• 3.4 讨论54-57
• 结语57-59
• 参考文献59-66
• 附录66-72
• 在校期间发表论文72-73
• 致谢73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：470438