LPS诱导巨噬细胞活化过程中Pim-1表达及调控通路的研究

发布时间：2017-06-22 17:09

  本文关键词：LPS诱导巨噬细胞活化过程中Pim-1表达及调控通路的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨LPS诱导巨噬细胞活化过程中,Pim-1的动态表达情况及抑制PI3K、P38MAPK、MEK1/2、JAK2信号关键分子对巨噬细胞中Pim-1表达的影响。 方法：分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为7组,各组分别用1μg/ml脂多糖(LPS)处理Oh,1h,2h,4h,8h,12h,24h,利用q-RT PCR、Western blot技术检测各组巨噬细胞中Pim-1mRNA及Pim-1蛋白的动态表达情况。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为6组,各组分别用LPS, DMSO+LPS, LY294002(P13K抑制剂)+LPS, SB203580(P38MAPK抑制剂)+LPS, AG490(MEK1/2抑制剂)+LPS,U0126(JAK2抑制剂)+LPS处理细胞,利用Western blot技术检测各特异性信号分子抑制剂对LPS诱导的巨噬细胞中Pim-1蛋白表达的影响。 结果：①LPS刺激能迅速上调巨噬细胞中Pim-1mRNA水平,LPS刺激1h后即可检测到Pim-1mRNA表达增高,Pim-1mRNA高峰在LPS刺激2h出现,约是对照组的6倍,LPS刺激12h后Pim-1mRNA即回落至基础水平。②LPS刺激能迅速上调小鼠腹腔巨噬细胞中Pim-1蛋白的表达,LPS刺激1h后即可检测到Pim-1蛋白表达增高；Pim-1蛋白水平在LPS刺激1-8h后维持增高水平,LPS刺激12h后Pim-1蛋白水平即回落至基础水平。③P13K抑制剂,P38MAPK抑制剂,MEK1/2抑制剂,JAK2抑制剂分别下调巨噬细胞中p-AKT, p-P38, p-ERK, p-JAK2的表达,PI3K、P38MAPK、MEK1/2、JAK特异性抑制剂均能下调LPS诱导的巨噬细胞中Pim-1蛋白表达水平。 结论：①巨噬细胞中Pim-1mRNA及蛋白在LPS刺激后迅速表达上调,体现Pim-1早期即刻基因的特性。Pim-1在巨噬细胞早期活化过程中发挥调节作用。②PI3K/AKT、P38MAPK、MEK/ERK、 JAK2/STATs信号通路均参与调控巨噬细胞中Pim-1的表达。
【关键词】：Pim-1 巨噬细胞 炎症反应 PI3K P38MAPK JAK NEK1/2
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 本文主要英汉~.略语名词对照表11-13
• 前言13-15
• 第一章 LPS诱导巨噬细胞活化过程中Pim-1的表达15-31
• 1 材料与方法15-25
• 1.1 材料15-17
• 1.1.1 实验动物15
• 1.1.2 主要试剂15-16
• 1.1.3 主要仪器设备16-17
• 1.2 实验方法17-25
• 1.2.1 主要溶液的配制17-19
• 1.2.2 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞及实验分组19-20
• 1.2.3 Real time PCR检测Pim-1 mRNA的表达20-22
• 1.2.4 Westernblot技术检测Pim-1蛋白的表达22-25
• 1.2.5 统计学分析25
• 2 结果25-29
• 2.1 小鼠巨噬细胞培养情况25-26
• 2.2 LPS诱导巨噬细胞活化过程中Pim-1 mRNA的动态表达26-27
• 2.3 LPS诱导巨噬细胞活化过程中Pim-1蛋白的动态表达27-29
• 3 讨论29-31
• 第二章 巨噬细胞中调控Pim-1表达的关键信号分子31-43
• 1. 材料与方法31-34
• 1.1 材料31-32
• 1.1.1 实验动物31
• 1.1.2 主要试剂31-32
• 1.1.3 主要仪器设备32
• 1.2 实验方法32-34
• 1.2.1 主要溶液的配制32-33
• 1.2.2 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞及实验分组33
• 1.2.3 Westernblot技术检测p-AKT、p-P38、p-ERK、p-JAK2、Pim-1蛋白的表达33-34
• 1.2.4 统计学方法34
• 2 结果34-38
• 2.1 p-AKT、p-P38、p-ERK、p-JAK2蛋白表达情况34-37
• 2.2 特异性信号分子抑制剂对巨噬细胞中Pim-1蛋白表达的影响37-38
• 3 讨论38-43
• 全文总结43-44
• References44-52
• 综述52-66
• References60-66
• 致谢66

【参考文献】

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本文编号：472497