呼吸道合胞病毒分离培养及其F蛋白基因变异分析

发布时间：2017-06-23 07:01

  本文关键词：呼吸道合胞病毒分离培养及其F蛋白基因变异分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分巢式PCR与病毒分离培养对RSV检测的差异及其临床意义分析 目的：探讨巢式PCR (N-PCR)、病毒分离培养两种不同方法检测呼吸道合胞病毒（RSV）的差异性及其差异性提示的临床意义。 方法：收集2010年1月-2012年8月呼吸病房住院患儿鼻咽抽吸物（NPAs），同时采用N-PCR、病毒分离培养方法检测RSV。采集患儿临床资料，进行统计学分析。结果：1143份病例中，N-PCR检出RSV阳性共458份（总阳性率：40.1%，其中RSVA31.7%；RSV B为7.7%；RSVA及RSV B同时检出标本0.7%）。病毒分离培养方法检出RSV阳性标本204份（17.8%）。分析N-PCR及病毒分离培养检测结果：两种方法检测均阳性（P+I+）标本共165份，均阴性标本（P-I-）646份（一致性为70.1%），，两种方法差异最大部分在于N-PCR阳性、病毒分离培养阴性的（P+I-）标本共293份，占总标本数25.6%。P+I-组与P-I-组比较有如下临床特点：患儿年龄小、住院时间长；RSV检出率冬季最高、夏季最低；发热患儿比例低；咳痰、喘息、呼吸困难、重症肺炎、呼吸衰竭患儿比例较高，其差异有统计学意义（P0.05），临床符合RSV感染的特征。P+I-组与P+I+组比较具有患儿入院前病程更长（P=0.005），喘息患儿比例低（P=0.009）的特点。 结论：N-PCR和病毒分离培养两种方法对RSV检出的差异性与患儿入院前病程有关，推测随着病程延长患儿呼吸道RSV滴度降低导致病毒分离培养阳性率下降。P+I-组符合RSV感染的特征，其临床特点与该组患儿处于病程后期病毒滴度较低有关。N-PCR检测RSV的敏感性及特异性良好。 第二部分呼吸道合胞病毒F蛋白基因变异及帕利珠单抗对临床分离株的中和能力分析 背景：RSV是婴幼儿时期急性下呼吸道感染最主要的病毒病原体。F蛋白是RSV重要的表面糖蛋白之一，F蛋白不仅是HLA限制性CTL细胞识别的靶蛋白还是中和抗体识别的靶点，目前唯一应用于临床预防高危患儿RSV感染的帕利珠单抗即与F蛋白结合。研究F蛋白分子流行病学对于RSV的疫苗研发有相当重要。 目的：研究中国重庆地区RSV F蛋白基因变异、CTL识别表位的变异及帕利珠单抗对临床分离株的中和能力。 方法：采集2009年6月-2012年3月重庆医科大学附属儿童医院呼吸一病房因急性下呼吸道感染住院的患儿鼻咽抽吸物共1800份。标本进行RSV病毒分离培养，提取RSV临床株的核酸，逆转录后扩增F基因全长。对PCR产物进行常规测序，序列拼接。用MEGA软件进行系统进化分析及分析CTL识别表位变异情况。用western blot及微量中和试验的方法验证帕利珠单抗与临床分离株的结合能力。 结果：分离RSV临床株333例，阳性率为18.5%（RSVA：277；RSV B：55；RSV A与RSV B同时阳性标本1例)。对107例RSV A，23例RSV B进行F基因全长测序。系统进化分析提示RSV F基因高度保守，在氨基酸位点16,25,45,102,122,124,209及447存在显著的氨基酸变异，同时也存在HLA限制性CTL识别表位氨基酸变异。在RSV A临床分离株中，帕利珠单抗结合的抗原位点276存在氨基酸天冬酰胺→丝氨酸(N→S)的变异，且有09年-12年逐年增加的趋势。Western blot及微量中和实验结果证实在位点276N→S的变异不影响帕利珠单抗与RSVA临床分离株的结合。 结论：中国地区RSV F基因在地域及时间上高度保守的同时也存在变异，F基因的分子流行病学监测研究将对疫苗的发展起至关重要的作用。
【关键词】：呼吸道合胞病毒 N-PCR 病毒分离培养 临床特点 F蛋白 基因变异 帕利珠单抗
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.6;R3416
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-14
• 第一部分 巢式 PCR 与病毒分离培养对 RSV 检测的差异及其临床意义分析14-23
• 前言14
• 1.材料与方法14-18
• 2.实验结果18-21
• 3.讨论21-23
• 第二部分 呼吸道合胞病毒 F 蛋白基因变异及帕利珠单抗对临床分离株的中和能力分析23-39
• 前言23-24
• 1.材料与方法24-29
• 2.实验结果29-36
• 3.讨论36-39
• 全文总结39-40
• 参考文献40-46
• 文献综述46-52
• 参考文献49-52
• 致谢52-53
• 攻读学位期间发表的文章目录53-54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 赵林清 ,钱渊,王之j,朱汝南,邓洁;呼吸道合胞病毒检测方法比较[J];临床儿科杂志;2003年01期

2 杨瑞生;呼吸道合胞病毒四种检测方法的比较分析[J];中国误诊学杂志;2005年17期

  本文关键词：呼吸道合胞病毒分离培养及其F蛋白基因变异分析，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：474188