PLP-I基因在小鼠睾丸中的表达定位及多克隆抗体制备

发布时间：2017-06-24 00:06

  本文关键词：PLP-I基因在小鼠睾丸中的表达定位及多克隆抗体制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： Prolactin-like protein I，简称PLP-I，又名PLP-J、Prlpj、Prlpi、prl3c1，与其他PRL基因家族成员不同，PLP-I是目前新发现的一种催乳素样基因。据文献报道，PLP-I主要在雌性胎盘蜕膜组织中有表达，在雄性无表达。本课题组发现，，PLP-I在雄性睾丸中也有表达。因此本研究拟探索PLP-I在小鼠睾丸中的表达定位，并制备多克隆抗体及PLP-J上调表达慢病毒，为深入研究PLP-J基因功能奠定基础。 方法： 采用原位杂交、免疫组化及免疫荧光方法对PLP-I在小鼠睾丸中表达进行定位，采用RT-PCR方法与Western Blotting方法检测不同年龄段mRNA表达水平与蛋白表达水平。 设计多肽肽段序列，构建原核表达载体PET30a-PLP-I，通过IPTG诱导，获得纯化抗原，免疫兔，获得PLP-I抗体。 构建慢病毒过表达载体，制备和包装PLP-I过表达慢病毒，转染TM3睾丸Ledig细胞，筛选稳定细胞株，采用RT-PCR及WB分别检测PLP-I基因过表达后的mRNA及蛋白表达水平。采用流式细胞仪检测细胞周期改变情况。 结果： 1． RT-PCR以及WB结果显示PLP-I在小鼠睾丸中有表达，且表达趋势为成年组最高，18day组最低。 2．ISH及IHC法结果显示PLP-I阳性表达于小鼠睾丸Ledig细胞，IF染色法结果显示PLP-I在TM3Ledig细胞的胞浆中表达。 3．成功制备PLP-I抗体。 4．慢病毒介导PLP-I过表达，细胞周期及细胞凋亡实验研究表明PLP-I可能不影响细胞增殖与凋亡。 结论： 首次发现PLP-I在雄性小鼠睾丸中表达，其主要定位于睾丸Ledig细胞中；PLP-I过表达对TM3细胞增殖与凋亡无明显作用。
【关键词】：prolactin-like protein I Ledig细胞 睾丸
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-13
• 第一部分 PLP-I 基因在睾丸组织中的表达13-28
• 前言13
• 1 材料13-16
• 2 方法16-23
• 3 结果23-27
• 4 讨论27
• 5 小结27-28
• 第二部分 PLP-I 基因抗体制备及纯化28-37
• 前言28
• 1 材料28-30
• 2 方法30-33
• 3 结果33-35
• 4 讨论35-36
• 5 小结36-37
• 第三部分 PLP-I 基因慢病毒制备及其对 TM3 细胞生长周期及细胞凋亡的影响37-44
• 前言37
• 1 材料37-38
• 2 方法38-41
• 3 结果41-43
• 4 讨论43
• 5 小结43-44
• 全文总结44-45
• 参考文献45-47
• 文献综述47-52
• 参考文献49-52
• 致谢52-53
• 攻读硕士学位期间发表的论文53-54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王广兰;宫璀璀;刘亚利;刘珊;王文丽;王轩;邰苏豫;高天蓝星;;重组人sCR1多克隆抗体制备及纯化鉴定[J];实用医药杂志;2008年10期

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本文编号：476632