狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析

发布时间：2017-06-25 05:05

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【摘要】：目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。
【作者单位】： 南京医科大学病理学系;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室;江阴力博医药生物技术有限公司;南京军区军事医学研究所;
【关键词】： 狂犬病病毒 狂犬病病毒糖蛋白 Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统 纯化 抗体
【基金】：国家自然科学基金项目(81273325,81202370) 江苏省社会发展项目(BE2011842) 大学生创新计划(Ky101J201217)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RV)所致的自然疫源性人畜共患急性传染病。临床表现主要为恐水、畏光、吞咽困难、狂躁等,发病后病死率为100%。狂犬病病毒为负链RNA病毒,可编码核蛋白、磷蛋白、基质蛋白、糖蛋白和转录酶大蛋白,其中糖蛋白是狂犬病病毒的主要保护性抗原,有

【共引文献】

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1 李祥魁;范翠英;崔亚君;刘璇;;重组蛋白可溶性表达促进标签的研究进展[J];生物技术;2013年02期

2 刘春;曾伟伟;王庆;李凯彬;王芳;常藕琴;梁慧丽;吴淑勤;;杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)弹状病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J];水产学报;2014年01期

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本文编号：480837