过表达VCAM-1对间充质干细胞免疫特性的影响

发布时间：2017-06-25 17:02

  本文关键词：过表达VCAM-1对间充质干细胞免疫特性的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：摘要目的：克隆小鼠血管细胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)cDNA全长,构建绿色荧光蛋白标记的VCAM-1基因逆转录病毒载体。探讨VCAM-1基因在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)中过表达对细胞免疫学特性的影响,为优化MSC的临床应用提供依据。 方法：采用DNA重组技术,将目的基因VCAM-1克隆至含有报告基因EGFP的逆转录病毒表达载体MIGR1中；在脂质体介导下,将重组的逆转录病毒表达质粒转染293T细胞,收获携带VCAM-1基因的重组逆转录病毒的上清,并感染MSC细胞系C3H10T1/2,荧光显微镜下观察细胞形态和感染效率；流式细胞术检测MSC膜表面的VCAM-1表达情况；3H-TdR掺入法测定过表达VCAM-1的MSC对其免疫学特性的影响。 结果：成功构建过表达VCAM-1基因的逆转录病毒载体,流式细胞术检测结果表明VCAM-1在MSC细胞系C3H10T1/2中稳定高表达。 进一步,过表达VCAM-1基因的MSC细胞系C3H10T1/2形态无改变。与转染空载体的C3H10T1/2相比,过表达VCAM-1的C3H10T1/2对于有丝分裂原诱导的T淋巴细胞增殖抑制作用显著增强,且这种抑制效应呈剂量依赖性,随着C3H10T1/2细胞数量的逐渐增加,其抑制效应逐渐增强。当C3H10T1/2与效应细胞比例为1：10时,转染了空载体的C3H10T1/2组淋巴细胞增殖活性(cpm值)降低了29.8%,而过表达VCAM-1的C3H10T1/2组则降低了65.3%,,抑制率是空载体C3H10T1/2组的2.16倍。 结论：过表达VCAM-1可显著增强间充质干细胞系C3H10T1/2抑制T细胞活化的能力,为下一步利用过表达VCAM-1的MSCs治疗相关免疫疾病奠定了实验基础和理论依据。图9幅,表13个,参考文献53篇。
【关键词】：血管细胞粘附分子1 间充质干细胞 免疫抑制
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-9
• 英文~.略词表9-11
• 前言11-14
• 1 VCAM-1逆转录病毒载体的构建与鉴定14-30
• 1.1 对象与方法15-25
• 1.1.1 对象15-17
• 1.1.2 方法17-25
• 1.2 结果25-27
• 1.2.1 小鼠VCAM-1基因的RT-PCR扩增25
• 1.2.2 重组逆转录病毒质粒MIGR1-VCAM-1的构建及鉴定25-27
• 1.3 讨论27-29
• 1.4 小结29-30
• 2 过表达VCAM-1的间充质干细胞及其免疫特性研究30-44
• 2.1 对象与方法31-36
• 2.1.1 对象31-33
• 2.1.2 方法33-36
• 2.2 结果36-39
• 2.2.1 逆转录病毒质粒及重组逆转录病毒质粒在包装细胞T293中的转染率分析36
• 2.2.2 VCAM-1在间充质干细胞系C3H10T 1/2中稳定过表达36-37
• 2.2.3 过表达VCAM-1的间充质干细胞系C3H10T 1/2抑制T细胞增殖37-39
• 2.3 讨论39-43
• 2.4 小结43-44
• 3 结论44-45
• 参考文献45-50
• 攻读学位期间主要的研究成果目录50-51
• 综述51-62
• 综述参考文献55-62
• 致谢62-63
• 附件63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 司英健;张曦;陈幸华;刘耀;高蕾;高力;张诚;彭贤贵;王庆余;;VCAM-1和EGFP双基因共表达重组腺病毒的构建[J];重庆医学;2007年17期

2 林传明;顾健;;间充质干细胞对系统性红斑狼疮血栓易发状态的免疫调节和修复机制研究新进展[J];中国实验血液学杂志;2011年04期

  本文关键词：过表达VCAM-1对间充质干细胞免疫特性的影响，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：482832