耐甲氧西林金黄色葡萄球菌表型与基因型分析研究

发布时间：2017-06-26 18:21

  本文关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌表型与基因型分析研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过分析临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA)对多种抗菌药物的耐药性及耐药特点,从表型和基因型两个层面来分析研究MRSA的多重耐药机制,寻找药物作用的新靶点,为临床合理有效使用抗菌药物,治疗MRSA感染以及预防耐药菌株的不断扩大提供一定的帮助。 方法：(1)本实验收集了山西医科大学第一医院检验科、山西医科大学第二医院检验科和山西省人民医院检验科从2012年1月到12月分离的金黄色葡萄球菌152株。采用法国梅里埃VITEK-Ⅱ细菌鉴定系统对收集菌株进行了确证试验,152株均为金黄色葡萄球菌。依据美国临床实验室标准化研究所(NCLSI)标准操作规程,采用K-B (Kirby-Bauer)琼脂扩散法和法国梅里埃VITEK-Ⅱ药敏分析系统对收集菌株进行了耐药表型确证和药物敏感试验,其中51株为MRSA,并对51株MRSA进行了p-内酰胺酶检测和耐药特点分析。(2)用E-test卡测定了实验菌株对万古霉素的敏感性,即实验菌株对万古霉素的最低抑菌浓度(MIC)。(3)提取51株MRSA菌株DNA,采用特异性引物序列聚合酶链式反应(PCR)扩增法进行mecA, mecI、 mecRl基因检测。(4)挑选4株具有代表性和特殊性的菌株,对其DNA扩增产物进行测序。(5)运用多重PCR扩增法对其进行了MRSA的耐药性基因岛(SCCmec)分型。(6)同时运用多重PCR扩增法进行MRSA毒力基因方面的研究。 结果：(1)MRSA对β-内酰胺类药物高度耐药,耐药率达100%,环丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素、红霉素、四环素、替考拉宁、复方磺胺甲恶唑、磷霉素、利奈唑胺、利福平和万古霉素的耐药率分别为88.2%、86.3%、86.3%、84.3%、82.4%、0%、15.7%、29.4%、0%、39.2%、0%。(2)未发现耐万古霉素的菌株。(3)实验菌株mecA、 mecI、mecRl基因检出率全部为100%。(4)基因测序表明本地MRSA菌株与基因库中已报道的菌株同源性在97%以上。(5)实验菌株SCCmec分型发现多为Ⅱ型和Ⅲ型,另有29株可能为Ⅱ型新的亚型。(6)毒力基因检测显示femA基因检出率为100%,肠毒素基因see携带率为76.5%,sed携带率为47.1%,sec携带率为5.9%；表皮剥落素基因etb携带率为49.0%；中毒性休克综合症毒素基因tst携带率为5.9%；有43.1%(22/51)株菌株同时带有两种肠毒素基因,有39.2%(20/51)株菌株同时带有两种毒素基因,有5.9%(3/51)株菌株同时带有三种毒素基因。 结论：(1)收集的金黄色葡萄球菌中,β-内酰胺类药物耐药率高达100%,MRSA对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺敏感,对其他抗菌药物均呈多重耐药,耐药趋势严峻,需要对目前药效的抗生素规范管理以延缓其耐药进程。加强对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺等常用药物最小抑菌浓度(MIC)的监测和临床报告,关注万古霉素对MRSA治疗效果不佳的患者。(2)通过基因扩增和测序发现本地区菌株的mec基因主要是A型,菌株的同源性与已报道的菌株同源性在97%以上,同源性比较高,未出现较大的变异株。(3)运用多重PCR技术对51株MRSA进行SCCmec分型,发现了Ⅱ型新的亚型。探明了本地区MRSA的SCCmec型别或者亚型种类,阐明了本地区MRSA多重耐药现状及流行趋势,为临床制定有效的预防策略和治疗措施、控制MRSA的漫延以及暴发流行提供了科学依据,为更加深入了解和研究MRSA多重耐药特征及其耐药机制奠定了基础。(4)毒力基因检测发现,本地区MRSA不仅高度耐药,SCCmec亚型同时耐两类四种抗菌药物,同一菌株同时可检测到两种毒素基因,表明耐药程度严重,多重耐药模式复杂。
【关键词】：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 多重耐药 PCR 葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)分型
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378.1
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-9
• 第1章 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌表型分析9-14
• 1.1 实验对象9
• 1.2 实验试剂、仪器9
• 1.3 实验方法9-10
• 1.3.1 金黄色葡萄球菌的鉴定9-10
• 1.3.2 MRSA的筛选与确证10
• 1.3.3 药敏实验10
• 1.4 实验结果10-12
• 1.4.1 耐药表型检测结果11-12
• 1.4.2 药敏试验结果12
• 1.5 讨论12-13
• 1.6 结论13-14
• 第2章 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因型分析14-33
• 2.1 实验试剂、器材14
• 2.2 实验方法14-20
• 2.2.1 细菌模板DNA的制备15
• 2.2.2 mec基因PCR测定15-16
• 2.2.3 SCCmec多位点PCR测定16-18
• 2.2.4 MRSA毒力基因测定18-19
• 2.2.5 电泳及成像19-20
• 2.2.6 mec基因位点扩增产物序列测定20
• 2.3 结果20-30
• 2.3.1 mec基因PCR测定结果20-23
• 2.3.2 mec基因测序结果23-24
• 2.3.3 mec基因扩增产物与基因库中已报道序列比对结果24-26
• 2.3.4 SCCmec分型结果26-27
• 2.3.5 MRSA毒力基因检测结果27-30
• 2.4 讨论30-32
• 2.5 结论32-33
• 结论33-34
• 参考文献34-37
• 综述37-51
• 综述的参考文献44-51
• 攻读学位期间的研究成果51-52
• 致谢52-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：487162