人胱抑素C的原核表达及包涵体复性研究

发布时间：2017-06-30 09:02

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【摘要】：构建胱抑素C原核表达载体p Cold1-cysc,p ET28a-cysc,p ET32a-cysc和p ET41a-cysc及相应的BL21(DE3)表达菌株,最终得到重组人胱抑素C蛋白。应用基因工程手段,原核表达,亲和层析及透析复性的方法对目的蛋白进行表达,纯化和复性。结果:经分析后,选取表达量较大的菌株BL21(DE3)p ET32a-cysc和BL21(DE3)p Cold1-cysc,对目的蛋白进行提取及纯化,对纯化后的可溶及包涵体形式的重组胱抑素C进行透析复性及免疫活性的检测。Western blotting及ELISA结果显示,携带有不同融合标签的可溶性重组胱抑素C或包涵体在透析复性后具有不同的免疫活性。结论:在大肠杆菌中成功表达并得到人胱抑素C的蛋白,复性后得到了重组胱抑素C的活性形式。
【作者单位】： 广州万孚生物技术股份有限公司;
【关键词】： 胱抑素C 原核表达 重组蛋白 包涵体 复性
【分类号】：R392;Q78
【正文快照】： 胱抑素C(Cystatin C,Cys C)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂,广泛存在于人体各种组织的有核细胞和体液中[1],其基因cysc能在所有的有核细胞内以恒定速度持续转录与表达,无组织特异性,人体循环中的Cys C仅经肾小球滤过而被清除,并在近曲小管重吸收,但重吸收后被完全代谢分解,不返回

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本文编号：501290