肠道病毒71型3C蛋白酶拮抗TAK1复合体介导的天然免疫信号通路的机制研究

发布时间：2017-06-30 20:20

  本文关键词：肠道病毒71型3C蛋白酶拮抗TAK1复合体介导的天然免疫信号通路的机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：自2008年被列为丙类传染病以来,手足口病报告发病数和死亡数一直居于我国丙类传染病首位,严重危害儿童身体健康,影响经济发展,并引起社会问题,成为当前我国传染病防控的重点。肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病最重要病原体之一,但其致病机制尚未阐明。研究表明天然免疫逃逸在EV71感染致病中发挥重要作用。尽管我们和其他课题组前期研究发现EV71可以通过阻断天然免疫信号通路的多个靶点,从而拮抗宿主天然免疫,但其机制尚不完全清楚。我们发现EV713C还可切割天然免疫信号通路的关键调节因子TGF-p活化激酶1(TAK1),本研究以此为切入点,深入研究了EV71对于TAK1复合体的影响及调控机制。 EV71感染细胞试验显示病毒感染可引起TAK1复合体蛋白表达的减少,包括TAK1, TAK1结合蛋白1,2和3(TAB1, TAB2和TAB3)。免疫共沉淀试验表明EV71编码的3C蛋白酶可以与TAK1和TAB2蛋白结合,并引起TAK1、TAB1、TAB2和TAB3这四个蛋白的切割,从而抑制该复合物引起的NF-κB启动子的激活。通过检测3C蛋白酶抑制剂和3C蛋白酶活性位点突变对于TAK1蛋白复合体的影响,发现其抑制剂能够抑制3C蛋白酶对于TAK1复合体的切割作用,而缺失3C蛋白酶活性的突变体则不能切割TAK1复合体,表明3C的蛋白酶活性对于TAK1复合体的切割是必需的。利用双荧光素酶报告系统,显示缺失3C蛋白酶活性位点的突变体不能抑制TAK1复合物引起的NF-κB启动子的激活,进一步说明3C蛋白酶在TAK1介导的信号通路中的重要作用。通过突变TAK1复合体四个蛋白中3C可能的切割区域,明确了3C在TAK1复合体中的切割位点,TAK1中为Q360-S361, TAB1中为Q414-G415和Q451-S452, TAB2中为Q113-S114, TAB3中为Q173-G174和Q343-G344。过表达TAB2可以明显抑制病毒复制,而TAB2切割片段则不能抑制病毒复制,提示TAK1复合体和3C蛋白之间的平衡可能是病毒感染的一个重要调控点。 另外,还发现EV71感染可引起干扰素信号通路的重要分子TRAF3蛋白的下调,这一作用可通过3C切割TRAF3(切割位点为Q242-S243)来实现。3C可减少TRIF和TRAF3的相互作用,从而干扰宿主的干扰素反应。 综上所述,本研究发现了EV71拮抗宿主天然免疫反应的新靶点,提示了EV71拮抗宿主天然免疫机制的复杂性,进一步丰富了对于EV71天然免疫拮抗机制的认识,为阐明EV71的致病机制和发现抗病毒药物靶点提供了基础。
【关键词】：肠道病毒71型 3C蛋白酶 天然免疫 TAK1复合体 TRAF3
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-27
• 一、EV71和手足口病10-14
• 二、抗病毒天然免疫14-22
• 三、TAK1复合体在天然免疫信号通路中的地位和作用22-25
• 四、TRAF3在抗病毒天然免疫中的作用25-26
• 五、总结与展望26-27
• 实验材料和方法27-40
• 一、实验材料27-33
• 二、实验方法33-40
• 实验结果40-58
• 第一部分 肠道病毒71型3C蛋白酶拮抗TAK1复合体介导的天然免疫信号通路的机制研究40-54
• 1 EV71感染可降低TAK1复合体蛋白的表达40-41
• 2 EV71感染对细胞因子表达的影响41-42
• 3 EV713C蛋白引起TAK1复合体的切割42
• 4 3C切割TAK1复合体可抑制其引起的NF-κB激活42-43
• 5 EV713C的蛋白酶活性对于切割TAK1复合体是必需的43-46
• 6 3C蛋白酶活性对TAK1复合体介导NF-κB激活的影响46
• 7 EV713C可与TAB2和TAK1相互作用46-47
• 8 3C对TAK1复合体切割位点的确定47-50
• 9 过表达TAB2可以抑制EV71复制50-52
• 10 TAB2的切割片段不引起NF-κB的激活52
• 11 TAB2的切割片段不能抑制病毒复制52-54
• 第二部分 EV71 3C蛋白引起肿瘤坏死因子3的切割54-58
• 1 EV71感染细胞可降低TRAF3蛋白表达54
• 2 EV71 3C蛋白切割TRAF354-55
• 3 EV71 3C蛋白酶活性在切割TRAF3中发挥重要作用55-56
• 4 TRAF3切割位点的确定56
• 5 3C可减少TRAF3与TRIF的结合56-58
• 讨论58-61
• 总结61-62
• 参考文献62-71
• 缩略表71-74
• 发表文章74-75
• 致谢75

【参考文献】

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1 张寿斌;廖华;黄呈辉;谭庆瑜;张炜灵;黄艳;陈侃;邱素清;林静;幸思忠;廖月红;;深圳237例手足口病肠道病毒血清型基因及临床特征[J];中国当代儿科杂志;2008年01期

2 管玉雷;马海霞;宋纪蓉;孟佳宁;胡荣祖;;3-硝基-1,2,4-三唑-5-酮的二甲胺盐的比热容、热力学性质及绝热至爆时间[J];化学通报;2009年01期

  本文关键词：肠道病毒71型3C蛋白酶拮抗TAK1复合体介导的天然免疫信号通路的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：503393