SrtA大肠杆菌系统表达OPG及功能研究

发布时间：2017-07-02 20:11

  本文关键词：SrtA大肠杆菌系统表达OPG及功能研究

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【摘要】：骨保护素作为OPG/RANKL/RANK信号通路的重要分子之一,参与了骨重建、免疫功能发育、血管疾病发生和乳腺组织的发育等一系列生理学功能。目前重组OPG的主要表达方式为昆虫杆状病毒表达体系和哺乳动物细胞表达系统。迄今为止还没有原核表达系统表达OPG的研究报道。在本研究中,我们利用SrtA大肠杆菌表达系统成功获得了具有生物学功能的OPG。该OPG具有RANKL和TRAIL的结合活性,表面等离子共振(SPR)技术测定表明其亲和力分别为8.2nM和88.7nM。随后的破骨细胞分化实验和细胞凋亡实验证明该OPG具有抑制破骨细胞分化能力和抑制TRAIL诱导的细胞凋亡能力。
【关键词】：OPG RANKL TRAIL 亲和力 破骨细胞 细胞凋亡
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378.21
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第一章 绪论10-22
• 1. OPG/RANKL/RANK信号通路的发现10-15
• 2. OPG/RANKL/RANK信号通路的调节15-17
• 3. OPG/RANKL/RANK在生理学上作用17-19
• 3.1 OPG/RANKL/RANK在骨发育中的作用17-18
• 3.2 OPG/RANKL/RANK在血管发育中的作用18-19
• 3.3 OPG/RANKL/RANK在免疫系统发育中的作用19
• 4. OPG与TARIL的关系19-20
• 5. OPG在临床上应用及本研究的意义20-22
• 第二章 OPGT的表达及功能研究22-45
• 1. 引言22-23
• 2. 材料方法23-36
• 2.1 质粒、菌株和细胞23
• 2.2 试剂、实验材料与仪器23-25
• 2.3 常用溶液的配制25-28
• 2.4 实验方法28-36
• 3. 结果36-44
• 3.1 利用pET-28a和pGEX-6p-1为载体表达结果36-38
• 3.2 pET-28a-SrtA-LPETG-OPGT的构建和表达38-39
• 3.3 OPGT与hTRAIL和hRANKL亲和力测定39-40
• 3.4 OPGT能抑制破骨细胞分化40-42
• 3.5 OPGT可以抑制TRAIL诱导的凋亡42-44
• 4. 讨论44-45
• 结论45-46
• 参考文献46-52

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