转化生长因子-β1（TGF-β1）对Kruppel样因子15（KLF15）的调控机制研究

发布时间：2017-07-03 21:07

  本文关键词：转化生长因子-β1（TGF-β1）对Kruppel样因子15（KLF15）的调控机制研究

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【摘要】：目的：探讨TGF-β1对kruppel样因子15（KLF15）表达的影响及其调控机制 方法：培养大鼠间质成纤维细胞（NRK-49F），给予TGF-β1刺激及KLF15质粒转染NRK-49F过表达观察KLF15和细胞外基质（ECM）变化，通过Real-time PCR检测KLF15mRNA和FNmRNA、CTGFmRNA、COLⅢmRNA变化，并通过WesternBlot检测KLF15和CTGF蛋白表达变化，通过ELSA检测细胞培养上清液FN蛋白和Ⅲ型胶原变化。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)细胞信号转导通路特异性断剂预处理NRK-49F后给予TGF-β1干预,观察FNmRNA、CTGFmRNA、COLⅢ mRNA、KLF15mRNA和KLF15蛋白及相关蛋白的磷酸化水平变化。 结果：TGF-β1干预大鼠肾脏成纤维细胞（NRK-49F）后促进细胞外基质的分泌，，抑制KLF15的表达。NRK-49F过表达KLF15后细胞外基质表达明显降低，ERK/MAPK和JNK/MAPK通路阻滞剂阻断TGF-β1对KLF15的抑制作用，而给予P38/MAPK通路阻滞剂并未抑制TGF-β1对KLF15的调控作用 结论：KLF15可抑制细胞外基质产生，TGF-β1可能通过ERK/MAPK和JNK/MAPK细胞内信号转导通路调控KLF15的表达，促进细胞外基质的产生。
【关键词】：TGF-β1 细胞外基质 KLF15
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目录6-9
• 中文详细摘要9-11
• 英文详细摘要11-14
• 缩略词表14-15
• 前言15-20
• 参考文献17-20
• 第一部分 TGF-β1 对细胞外基质分泌和 KLF15 表达的影响20-44
• 一、 材料与方法20-34
• （一） 材料20-22
• 1、 细胞系20-21
• 2、 主要试剂21
• 3、 主要耗材和仪器21-22
• （二） 方法22-34
• 1、 大鼠肾脏间质成纤维细胞培养和干预22
• 2、 实时定量 PCR22-24
• 3、 KLF15 质粒扩增24-25
• 4、 小鼠 KLF15 基因腺病毒包装25-31
• 5、 腺病毒感染 NRK-49F 细胞的最佳 MOI 值摸索31
• 6、大鼠肾脏间质成纤维细胞（NRK-49F）腺病毒感染31-32
• 7、 Western blot 检测 NRK-49F 细胞的 KLF15 和 CTGF 蛋白表达量32-33
• 8、 ELSA 法检测细胞上清液纤维连接蛋白和Ⅲ型胶原的表达33-34
• 9、 统计学处理34
• 二、 结果34-40
• （一） TGF-β1 对大鼠肾脏间质成纤维细胞（NRK-49F）细胞外基质及 KLF15 的影响34-36
• （二） 过表达 KLF15 及过表达后给予 TGF-β1 干预对细胞外基质分泌的影响36-40
• 三、 讨论40-41
• 参考文献41-44
• 第二部分 TGF-β1 调控 KLF15 的机制研究44-60
• 一、 材料与方法45-50
• （一） 材料45-46
• 1、 细胞系45
• 2、 主要试剂45
• 3、 主要耗材和仪器45-46
• （二） 方法46-50
• 1、 大鼠间质成纤维细胞（NRK-49F）培养和干预46
• 2、 实时定量 PCR46-49
• 3、 Western blot49-50
• 4、 统计学方法50
• 二、 结果50-56
• （一） 给予 ERK/MAPK 特异性阻滞剂预处理后 TGF-β1 干预 NRK-49F后 ERK 磷酸化水平、细胞外基质分泌和 KLF15 变化50-52
• （二） 给予 JNK/MAPK 特异性阻滞剂预处理后 TGF-β1 干预 NRK-49F 44后 JNK 磷酸化水平、细胞外基质分泌和 KLF15 变化52-54
• （三） 给予 P38/MAPK 特异性阻滞剂预处理后 TGF-β1 干预 NRK-49F 46后 JNK 磷酸化水平、细胞外基质分泌和 KLF15 变化54-56
• 三、 讨论56-57
• 参考文献57-60
• 全文总结60-61
• 综述61-67
• 参考文献64-67
• 在读期间完成和发表的文章67-68
• 致谢68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 胡志娟,李英;TGF-β/Smad信号通路与肾脏疾病的研究进展[J];中国中西医结合肾病杂志;2005年01期

2 唐雪栋;林瑞霞;杨青;李广波;刘延霞;陈波;;地黄提取物对Smads信号通路影响的实验研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年08期

3 贺玉珍;张李梅;牟授菡;陈晓健;尹燕志;鞠建伟;;中药干预转化生长因子-β_1在慢性肾脏病中的研究进展[J];中国中西医结合肾病杂志;2010年10期

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本文编号：515176