TLR7激活对HepG2细胞的增殖和迁移的影响

发布时间：2017-07-04 11:16

  本文关键词：TLR7激活对HepG2细胞的增殖和迁移的影响

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【摘要】：目的探讨TLR7配体Gardiquimod对HepG2细胞增殖及迁移的影响及其可能信号机制。 方法HepG2细胞经不同时间和剂量的Gardiquimod处理后，MTT技术分析Gardiquimod对HepG2细胞增殖的影响；Gardiquimod(2μg/ml)体外刺激细胞1-5d后流式细胞技术分析Gardiquimod对HepG2细胞增殖的影响；不同时间的Gardiquimod（2μg/ml）体外刺激HepG2细胞后，提取细胞总RNA和总蛋白， RT-PCR分析VEGF和TIMP1转录水平的变化；Western blot分析检测CyclinB1和CyclinE的表达量以及丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶（MAPKs-ERK1/2）信号通路，并通过MAPKs-ERK1/2特异性阻断剂PD98059阻断相应的信号途径，进而分析两者的相关性；细胞划痕技术检测Gardiquimod对HepG2迁移的影响。 结果HepG2细胞中表达TLR7，但较外周血单个核细胞（peripheral bloodmononuclear cell,PBMC）较少。MTT结果显示，不同时间或者剂量的Gardiquimod刺激HepG2细胞后，细胞的增殖被抑制。流式细胞技术结果表明，Gardiquimod（2μg/ml）处理细胞1-5d后，S期细胞的比例明显降低；Gardiquimod刺激HepG210min后下调细胞中VEGF mRNA的表达，而刺激细胞30min后TIMP1mRNA的表达有明显的上调；Western blot结果显示，不同时间的Gardiquimod（2μg/ml）能够抑制细胞中CyclinB1和CyclinE的表达；并且细胞中的ERK1/2的磷酸化水平明显降低；抑制剂结果显示PD98059能有效抑制HepG2细胞中ERK1/2磷酸化作用，并且上述VEGF的降低与其相关；细胞划痕结果表明，Gardiquimod（2μg/ml）刺激细胞不同时间后，细胞的迁移速度和程度都明显受到了抑制。 结论TLR7激动剂Gardiquimod可以有效的抑制HepG2细胞的增殖和迁移；并且TLR7激活能够下调HepG2细胞中VEGF的表达，，并与ERK1/2信号通路相关。
【关键词】：HepG2细胞 TLR7Gardiquimod 信号通路
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-10
• 1 引言10-15
• 2 材料与方法15-29
• 3 结果29-37
• 4 讨论37-40
• 5 结论40
• 6 参考文献40-45
• 7 附录45-46
• 致谢46-47
• 综述47-55
• 参考文献52-55

【参考文献】

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1 李莉,张声,林华,林建银;基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制剂表达失衡与胃癌浸润转移的关系[J];癌症;2002年03期

本文编号：517566