蛋白酶K单抗研制及其双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

发布时间：2017-07-04 23:03

  本文关键词：蛋白酶K单抗研制及其双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

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【摘要】：目的研制蛋白酶K单克隆抗体并构建定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法 ,用于生物制品中蛋白酶K的检测。方法用杂交瘤技术制备抗蛋白酶K的单抗,用棋盘法优化ELISA条件,建立定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法,分析其特异性、精密性和准确性。结果经免疫、融合、克隆、筛选到稳定分泌蛋白酶K单抗的杂交瘤细胞。获得1株阻断蛋白酶K活性的单抗5G6,以5G6为包被抗体、4D3为酶标抗体,构建蛋白酶K定量检测的ELISA方法。本方法线性相关系数R=0.99,线性范围为293.4~2 500 pg/ml;定量限度为293.4 pg/ml;变异系数为CV15%;回收率介于89.3%~129.2%之间,37℃6 d的回收率80%;与蛋白酶K以外的其他蛋白无交叉反应。结论获得阻断蛋白酶K活性的单抗,构建出灵敏、特异的蛋白酶K定量检测方法。
【作者单位】： 北京万泰生物药业股份有限公司;
【关键词】： 蛋白酶K 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
【分类号】：R392
【正文快照】： 蛋白酶K是一种从林伯氏白色念球菌(Tritirachiumalbum limber)中纯化得到的丝氨酸蛋白酶类[1],合成该蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Kerantin)为唯一碳氮源的环境中生长,因此得名[2]。由于蛋白酶K具有优良的蛋白水解特性,不仅常用于多种分子生物学和细胞生物学等相关实验,而且广

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：519604