基于微RNA的纳米药物抗三阴性乳腺癌的活性及机理研究

发布时间：2017-07-05 11:09

  本文关键词：基于微RNA的纳米药物抗三阴性乳腺癌的活性及机理研究

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【摘要】：乳腺癌的发病率在世界范围内居于女性恶性肿瘤的首位。其中三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）是指雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）及人类表皮生长因子受体（Her-2）的表达均为阴性的乳腺癌，约占乳腺癌的15%~20%。由于受体缺失，针对乳腺癌的特异性受体靶向治疗方法无法应用于TNBC。较其它类型的乳腺癌TNBC具有易复发、易转移和预后差等特点。因此，，研发新的治疗手段成为了TNBC研究领域的难点和热点。 MicroRNA(miRNA)作为一种单链非编码的小RNA通过与靶mRNA的3'-UTR碱基互补结合，促进靶mRNA的降解或抑制其翻译。近年来研究揭示miRNA与肿瘤的发生发展紧密相关。在调控癌基因和抑癌基因的表达中可发挥关键作用，参与调节肿瘤的生长、凋亡、侵袭、迁移和耐药性等。其中，MicroRNA-34a(miR-34a)是一个Qg源性的在乳腺癌中具有较强抑癌活性的miRNA。 当前，基于小RNA的干扰药物成为了新药研发的热点方向。但由于小核酸类药物分子本身穿透细胞膜的能力极差，而且在生理环境中极不稳定，没有靶向性，因此基于miRNA的新型药物研究的一个主要瓶颈是开发高效并具有良好生物相容性的输送载体。在本研究中，我们构建了一种可用于递送miRNA的基于透明质酸/硫酸鱼精蛋白聚电解质的纳米复合物(HP-IPECs)载体。该纳米复合物可以依靠电荷相互作用自组装形成，并且能够高效地包载miR-34a。 体内外的实验证明复合纳米载体可以有效地递送miR-34a到乳腺癌细胞和组织中。机理研究显示复合物纳米载体投递的miR-34a通过靶向CD44和Notch-1等信号途径诱导乳腺癌细胞的凋亡并抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和肿瘤生长。研究结果表明MHP-IPECs作为一种基于miRNA的生物可降解的纳米药物可以为三阴性乳腺癌的治疗提供新的思路。
【关键词】：聚电解质复合物 三阴性乳腺癌 MiR-34a
【学位授予单位】：北京工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373.9
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文缩写词7-11
• 第1章 绪论11-19
• 1.1 三阴性乳腺癌12
• 1.2 MiRNA 的生成12-13
• 1.3 MiRNA 与乳腺癌13-15
• 1.3.1 MiRNA 作为乳腺癌癌基因13-14
• 1.3.2 MiRNA 作为乳腺癌抑制基因14-15
• 1.4 纳米药物载体15-17
• 1.4.1 肿瘤的化学治疗15-16
• 1.4.2 肿瘤的基因治疗16
• 1.4.3 靶向纳米药物16-17
• 1.5 本课题的选题目的及主要研究内容17-19
• 第2章 MHP-IPECs 纳米药物的制备及体外抗肿瘤效果评价19-39
• 2.1 实验材料19-20
• 2.1.1 纳米载体19
• 2.1.2 细胞株19
• 2.1.3 实验试剂19-20
• 2.2 实验仪器20-21
• 2.3 实验方法21-28
• 2.3.1 HP-IPECs 和 MHP-IPECs 的制备21
• 2.3.2 HP-IPECs 的表征21
• 2.3.3 MHP-IPECs 血清稳定性分析21
• 2.3.4 MHP-IPECs 释放 miR-34a 的动力学21
• 2.3.5 细胞培养传代21-22
• 2.3.6 HP-IPECs 细胞毒性评价22
• 2.3.7 细胞免疫荧光22-23
• 2.3.8 细胞内 MHP-IPECs 分布23
• 2.3.9 检测转染后细胞内 miR-34a 水平23-24
• 2.3.10 MHP-IPECs 对乳腺癌细胞增殖的影响24-25
• 2.3.11 MHP-IPECs 对乳腺癌细胞侵袭的影响25
• 2.3.12 MHP-IPECs 对乳腺癌细胞迁移的影响25
• 2.3.13 细胞划痕实验25-26
• 2.3.14 流式细胞术检测细胞凋亡率26
• 2.3.15 检测细胞内 miR-34a 下游蛋白水平26-28
• 2.4 实验结果28-36
• 2.4.1 HP-IPECs 的理化性质28
• 2.4.2 MiR-34a 在血清中的稳定性和释放动力学评价28-30
• 2.4.3 HP-IPECs 的细胞毒性30-31
• 2.4.4 不同转移能力的乳腺癌细胞中 CD44 表达量定性31
• 2.4.5 MHP-IPECs 将 FAM 标记的 miR-34a 输送到肿瘤细胞31-32
• 2.4.6 MHP-IPECs 抑制乳腺癌细胞的增殖32-33
• 2.4.7 MHP-IPECs 降低乳腺癌细胞的侵袭与迁移能力33-34
• 2.4.8 MHP-IPECs 促进乳腺癌细胞的凋亡34-35
• 2.4.9 MHP-IPECs 抑制了 miR-34a 靶蛋白表达35-36
• 2.5 讨论36
• 2.6 小结36-39
• 第3章 MHP-IPECs 体内抗肿瘤效果评价39-49
• 3.1 实验材料39-40
• 3.1.1 纳米载体39
• 3.1.2 细胞株39
• 3.1.3 实验动物39
• 3.1.4 实验试剂39-40
• 3.2 实验仪器40
• 3.3 实验方法40-45
• 3.3.1 乳腺癌动物模型的建立40
• 3.3.2 动物分组与给药40-41
• 3.3.3 检测肿瘤组织内 miR-34a 水平41-42
• 3.3.4 检测肿瘤组织内 miR-34a 靶蛋白水平42-43
• 3.3.5 苏木素伊红(HE)染色43-44
• 3.3.6 免疫组织化学染色44
• 3.3.7 TUNEL 染色检测乳腺癌原位肿瘤细胞凋亡44-45
• 3.4 实验结果45-47
• 3.4.1 裸鼠移植瘤生长曲线和瘤重观察45
• 3.4.2 MHP-IPEC 抑制了肿瘤组织中 miR-34a 靶蛋白的表达45-46
• 3.4.3 免疫组织化学染色46-47
• 3.4.4 TUNEL 和 HE 染色47
• 3.5 讨论47-48
• 3.6 小结48-49
• 结论49-51
• 参考文献51-57
• 攻读硕士学位期间所发表的学术论文57-59
• 致谢59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 王梦迪;何广卫;;靶向递药系统白蛋白纳米粒的研究进展[J];安徽医药;2013年10期

2 季秀峰;石莉;邓意辉;;白蛋白纳米粒药物传递系统的研究进展[J];沈阳药科大学学报;2010年12期

3 罗湘;史艳侠;李志铭;张东生;苏争艳;姜文奇;;三阴乳腺癌的临床病理特征和预后分析[J];中国癌症杂志;2009年07期

4 吴小虎;代文杰;;Met:有望成为治疗三阴型乳腺癌的新靶点[J];中国普外基础与临床杂志;2013年07期

本文编号：521697