Cre重组酶调控的OVA-HBsAg转基因乙肝模型小鼠的制备及鉴定

发布时间：2017-07-07 10:03

  本文关键词：Cre重组酶调控的OVA-HBsAg转基因乙肝模型小鼠的制备及鉴定

  更多相关文章： 小鼠 转基因 重组酶类 肝炎 乙型 慢性

【摘要】：目的制备Cre重组酶调控的卵清蛋白(OVA)-HBs Ag转基因小鼠,为乙肝的防治提供更好的动物模型。方法采用原核显微注射方法将线性化的携带OVA-HBs Ag基因并带有Lox P位点的质粒注入C57BL/6J×DBA小鼠受精卵的雄原核内,制备受Cre重组酶调控表达的OVA-HBs Ag转基因小鼠。将F1代OVA-HBs Ag阳性母鼠与本室饲育的Alb-Cre转基因阳性公鼠进行杂交,获得子代小鼠,观察Cre对OVA-HBs Ag转基因小鼠HBs Ag的诱导表达情况。采用PCR、ELISA和免疫组化方法检测HBs Ag基因、Cre基因在转基因小鼠体内的整合及表达情况。结果共注射受精卵491枚,成活337枚,成活率68.6%。产下F0代小鼠29只,其中PCR阳性4只,外源基因整合率13.8%。目前已传至F4代,F1-F4代PCR阳性率分别为27.5%、32.0%、22.9%、25.0%,ELISA法未检测到血清中HBs Ag表达。将F1代OVA-HBs Ag阳性母鼠与Alb-Cre阳性公鼠杂交,获得16只子代小鼠,PCR检测Cre基因和HBs Ag基因双阳性的子代小鼠有6只,其中2只小鼠血清HBs Ag检测为阳性,诱导表达阳性率为33.3%。结论成功制备出OVA-HBs A转基因小鼠,且可稳定传代,Cre重组酶可以诱导小鼠体内HBs Ag的表达。
【作者单位】： 解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室;
【关键词】： 小鼠 转基因 重组酶类 肝炎 乙型 慢性
【基金】：广州市科技计划项目(201510010004)~~
【分类号】：R512.62;R-332
【正文快照】： 感染造成的,每年因HBV感染造成的死亡人数约为100万~200万[1-3]。HBV慢性感染的机制至今仍未明确,目前仍缺乏有效的治疗手段[4]。在乙肝相关研究中,乙肝动物模型具有非常重要的地位[5],但目前仍缺乏可用于慢性HBV感染和慢性乙肝研究的具有正常免疫功能的动物模型,客观上影响了

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 陈媚娟;尤玉琴;刘光泽;佟明华;黎经纬;李秀梅;孔祥平;;1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠的制备及检测[J];解放军医学杂志;2011年09期

2 陈丹丹;刘媛;姬旭慧;张玲;黄长山;崔宏;吕全军;;原发性肝癌发病影响因素的病例对照研究[J];郑州大学学报(医学版);2013年02期

3 杨晓鲲;徐贵森;;糖皮质激素治疗乙型肝炎病毒相关性肝衰竭疗效的Meta分析[J];解放军医学杂志;2013年07期

4 臧利敏;吴学炜;赵雪杰;方先珍;杨晓瑞;王庆端;常俊标;郑立运;;后天感染河南樱桃谷鸭乙型肝炎病毒模型的建立[J];郑州大学学报(医学版);2013年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张雨丽;张桂征;闭立辉;祁广军;赵爱春;;转绿色荧光蛋白基因家蚕品系的纯化与综合经济性状改良[J];蚕业科学;2013年02期

2 范昌发;貌盼勇;王佑春;;病毒性肝炎遗传修饰动物模型研究进展[J];传染病信息;2013年06期

3 冯英巧;杨元生;崔淑兰;陈垦;王晖;;肝纤维化实验动物模型造模方法及应用研究进展[J];广东药学院学报;2013年05期

4 钟文洲;陈正义;王齐全;;原发性肝癌发病危险因素的病例对照分析[J];安徽医药;2014年02期

5 晁哲;孙瑞萍;魏立民;刘圈炜;郑心力;刘海隆;黄丽丽;邓昌彦;王峰;;Lbx1与Lbx2基因在猪骨骼肌中的甲基化状态[J];中国畜牧兽医;2014年01期

6 李晨;游绍莉;辛绍杰;;HBV相关慢加急性肝衰竭前期概念及诊疗新进展[J];实用肝脏病杂志;2015年01期

7 孔祥平;刘光泽;易学瑞;;复制型HBV转基因小鼠的建立与应用[J];解放军医学杂志;2011年09期

8 许亚坡;周琳;王春峰;张连峰;;原发性肝细胞癌组织中血管紧张素转化酶Ⅱ与血管紧张素Ⅱ1型受体的表达[J];郑州大学学报(医学版);2013年05期

9 Shengjiu GU;Dan CHEN;Junbin QI;Meibo LI;Yourui XU;Kaimei ZHU;;Effects of Resveratrol on Proliferation and Cell Cycle of HepG-2 Cell[J];Medicinal Plant;2014年05期

10 綦利平;张平;江军;;乙型肝炎相关肝衰竭的治疗进展[J];临床消化病杂志;2014年04期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 方永胜;前列腺素E_1联合激素治疗重型肝炎40例疗效观察[J];安徽医药;2005年04期

2 张永贵;王江滨;季尚玮;;慢性乙型肝炎患者血清抗Hp抗体检测及抗Hp抗体与HBV载量和HBV基因型的关系[J];吉林大学学报(医学版);2008年02期

3 陈效鹏,陈兰翠,吴同生;糖皮质激素治疗重型肝炎57例疗效分析[J];中国医师杂志;1999年10期

4 谭永红;陈洁;向贵平;;小组心理干预对恶性肿瘤患者生存质量的影响[J];第三军医大学学报;2011年02期

5 尤玉琴;黄黎珍;刘光泽;佟明华;李秀梅;胡莲美;顾为望;孔祥平;;C基因型HBV转基因小鼠的制备[J];第四军医大学学报;2008年06期

6 付喜花;梁蔚芳;吴小东;沈国俊;何海棠;陈金军;侯金林;;鸭乙型肝炎病毒YMDD突变株体外耐药模型建立[J];南方医科大学学报;2011年04期

7 李梦东,聂青和;糖皮质激素治疗重型肝炎的临床及实验研究[J];实用肝脏病杂志;2005年01期

8 李丽军;李铭;李卫;李永华;;使用激素治疗重型肝炎价值的再探讨[J];实用肝脏病杂志;2006年03期

9 杨文龙,刘武,李涛;小剂量糖皮质激素治疗早期重型肝炎临床疗效观察[J];国外医学.流行病学传染病学分册;2005年05期

10 梁恒秋;余红平;谭盛葵;;原发性肝癌危险因素病例对照的非条件Logistic回归分析[J];广西医科大学学报;2007年06期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王剑,张莉,毛春明,程萱,侯宁,吕娅歆,杨晓;心脏组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立[J];军事医学科学院院刊;2005年01期

2 王友亮,程萱,崔芳,程竞,吕娅歆,杨晓;肝细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立[J];中华肝脏病杂志;2004年03期

3 吕涛;乔琰;王勇;;Cre重组酶的研究进展[J];东北农业大学学报;2009年12期

4 毛春明,杨晓,程萱,吕娅歆,周江,黄翠芬;角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立[J];遗传学报;2003年05期

5 李玲;国蓉;常绪生;印慨;张晔;刘志民;章卫平;;利用细菌内同源重组技术构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体[J];第二军医大学学报;2014年02期

6 郝振明,杨晓,程萱,周江,黄翠芬;软骨组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的研制和鉴定[J];遗传学报;2002年05期

7 绳纪坡,侯宁,程萱,杨晓,邓继先;中枢神经系统特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠[J];遗传学报;2004年12期

8 董铭,于澎,饶明俐,于涌;knock-in法建立Cre重组酶表达鼠系[J];哈尔滨医科大学学报;2002年01期

9 王剑,张继帅,侯宁,滕艳,程萱,杨晓;Cre重组酶在心肌细胞特异性转基因小鼠中的功能检测[J];军事医学科学院院刊;2005年05期

10 郑敬民,李坚,杨桦,傅继梁;基于Cre重组酶体系的小鼠HPRT定点整合打靶载体的构建及其应用[J];第二军医大学学报;2001年06期

中国重要会议论文全文数据库 前7条

1 王友亮;程萱;程竟;崔芳;吕娅歆;杨晓;;肝脏组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年

2 程萱;翁土军;谭晓红;侯宁;王健;林福玉;黄培堂;杨晓;;成骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）[C];2008年

3 谢胜松;徐娟;马武彬;刘强;陈金妹;黄行许;张永莲;;附睾头部特异表达Cre重组酶转基因小鼠模型的建立[A];第二届模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2012年

4 董铭;于澎;陈嘉峰;孟红梅;饶明俐;田中庸介;;Knock in法建立Cre重组酶鼠系[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年

5 侯宁;王剑;李文龙;张继帅;杨晓;;心脏和软骨组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的基因型鉴定[A];中国遗传学会七届一次青年研讨会暨上海高校模式生物E——研究院第一届模式生物学术研讨会论文汇编[C];2005年

6 韩文元;李文文;初明珠;倪金凤;申玉龙;;硫化叶菌重组酶RadA同源蛋白RadC功能的初步研究[A];2010年第四届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2010年

7 崔继哲;于胜楠;;利用Cre/loxP重组系统激活iaaH表达的研究[A];中国遗传学会植物遗传和基因组学专业委员会2009年学术研讨会论文摘要汇编[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 陈立梅;诱导性表达Cre重组酶转基因猪的建立[D];吉林大学;2010年

2 郑敬民;基于重组酶作用的小鼠ES细胞HPRT基因位点转基因定点整合系统研究[D];第二军医大学;2001年

3 赵增明;胃粘膜上皮细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的构建[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年

4 李兆丰;软化类芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中的表达及其产物特异性分析[D];江南大学;2009年

5 何军;高效木聚糖酶基因工程菌的构建及重组酶酶学性质与功效研究[D];四川农业大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 时令;Ⅱ型肺上皮细胞表达Cre重组酶转基因小鼠的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

2 杨春;肝特异性表达Cre重组酶载体和转基因猪成纤维细胞的构建[D];吉林大学;2008年

3 扎拉嘎白乙拉;肌腱细胞特异性Cre重组酶转基因小鼠的研制与鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年

4 杨丽华;四环素诱导的Cre重组酶表达载体的构建及其体外表达研究[D];福建医科大学;2009年

5 汪亮;重组酶删除载体的构建及其在动物细胞中的应用[D];东北农业大学;2009年

6 李文龙;血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

7 高媛媛;热诱导FLP重组酶删除转基因油菜外源基因的研究[D];贵州大学;2006年

8 肖雪宾;FLP重组酶表达载体的构建及其在FLP/FRT系统中的应用[D];吉林大学;2012年

9 吴少璞;功能性稳定表达Cre重组酶的vero-Cre细胞系的构建[D];郑州大学;2009年

10 周小玲;粗糙脉孢菌一种新植酸酶基因的克隆、鉴定和重组酶的生化特性[D];江南大学;2004年

，

本文编号：529715