P21蛋白亚细胞定位表达对人支气管上皮细胞凋亡的影响
发布时间：2017-07-14 05:01
本文关键词：P21蛋白亚细胞定位表达对人支气管上皮细胞凋亡的影响
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【摘要】：目的： 研究p21表达质粒转染16HBE细胞后，P21蛋白过表达的亚细胞定位及其对细胞凋亡的影响。 方法： 用p21表达质粒转染16HBE细胞，建立表达载体模型，再分别提取总RNA和胞核、胞浆蛋白，，用RT-PCR和western blot半定量方法研究P21蛋白过表达亚细胞定位情况，并用荧光显微镜及流式细胞仪分析P21蛋白过表达亚细胞定位对细胞凋亡的影响。 结果： 1.p21质粒组RNA表达与空质粒组、空白对照组有显著性差异（p=0.000㖞，空质粒组与空白对照组无明显差异（p=0.704）。 2. p21质粒组胞浆P21蛋白表达明显高于胞核（p=0.002），空质粒组和空白对照组胞核P21蛋白表达高于胞浆（p=0.033，0.007）。胞浆中P21蛋白表达，p21质粒组高于对照组（p=0.000）；空质粒组与空白对照组无明显差异（p=0.87）。胞核中P21蛋白表达三组无明显差异（p均＞0.05）。 3. p21质粒转染16HBE细胞24h-72h后能导致16HBE细胞凋亡，凋亡低于空质粒组和空白对照组，并随着时间延长，16HBE细胞凋亡减少，但在72h时晚期凋亡和死亡细胞明显增高。p21质粒组24h凋亡率明显高于48h（p=0.036）；空质粒组和空白对照组24h凋亡率明显低于48h（p=0.033, p=0.037）。p21质粒组分别与空质粒组和空白对照组有显著性差异（p＜0.05），空质粒组和空白对照组细胞凋亡无显著性差异（p＞0.05）。 结论： p21表达质粒转染16HBE细胞后主要在细胞浆内过表达并可抑制细胞凋亡。
【关键词】：P21 亚细胞定位 凋亡 表达质粒 细胞转染 人支气管上皮细胞
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：
- 摘要3-4
- ABSTRACT4-8
- 本文主要英汉缩略词表8-9
- 第1章 引言9-10
- 第2章 材料与方法10-19
- 2.1 主要试剂和材料10-11
- 2.2 主要设备11-12
- 2.3 部分试剂配制12-13
- 2.3.1 PCR 电泳液 TBE12
- 2.3.2 琼脂糖凝胶（2%）配制12
- 2.3.3 SDS-PAGE 电泳液12
- 2.3.4 转膜液12-13
- 2.3.5 SDS-PAGE 凝胶配制13
- 2.3.6 PBST13
- 2.3.7 封闭液13
- 2.4 细胞学实验13-15
- 2.4.1 细胞复苏13-14
- 2.4.2 细胞培养14
- 2.4.3 细胞传代14
- 2.4.4 细胞冻存14
- 2.4.5 质粒提取14
- 2.4.6 细胞转染(六孔板)14-15
- 2.4.7 细胞分组及处理15
- 2.5 RT-PCR 法检测 p21 基因的表达15-16
- 2.5.1 提取总 RNA15
- 2.5.2 总 RNA 定量15-16
- 2.5.3 引物见下表16
- 2.5.4 cDNA 合成16
- 2.5.5 PCR 扩增16
- 2.5.6 p21 mRNA 表达半定量分析16
- 2.6 Western blotting 方法检测 p21 蛋白的表达16-17
- 2.6.1 胞浆、胞核蛋白的提取16-17
- 2.6.2 Western blotting 方法操作步骤17
- 2.7 Annexin V/PI 检测细胞凋亡17-18
- 2.7.1 荧光显微镜观察细胞凋亡17-18
- 2.7.2 流式细胞仪分析细胞凋亡18
- 2.8 统计方法18-19
- 第3章 结果19-25
- 3.1 荧光显微镜观察细胞转染结果19
- 3.2 RT-PCR 测三组细胞 p21 基因表达19-20
- 3.3 Western Blot 测定三组细胞 P21 蛋白表达20-22
- 3.4 荧光显微镜观察三组细胞凋亡22-23
- 3.5 流式细胞仪分析三组细胞凋亡23-25
- 第4章 讨论25-31
- 4.1 细胞转染25-26
- 4.2 P21 蛋白亚细胞定位与细胞凋亡26-27
- 4.3 p21 作用途径27-28
- 4.4 p21 与呼吸系统疾病的关系28-29
- 4.5 不足和展望29-31
- 4.5.1 不足29
- 4.5.2 展望29-31
- 第5章 结论31-32
- 致谢32-33
- 参考文献33-38
- 附图38-39
- 综述39-45
- 参考文献43-45
【参考文献】
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本文编号：539705
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