铜绿假单胞菌外膜蛋白F原核载体构建、表达条件优化及免疫保护作用研究
本文关键词：铜绿假单胞菌外膜蛋白F原核载体构建、表达条件优化及免疫保护作用研究
【摘要】：目的构建并鉴定铜绿假单胞菌(PA)外膜蛋白F(Opr F)原核表达载体,分析Opr F蛋白免疫保护作用,优化Opr F蛋白诱导表达条件。方法通过分子克隆获得Opr F蛋白的表达菌株。利用切胶纯化获得Opr F蛋白,免疫小鼠,通过PA攻毒实验分析Opr F蛋白免疫保护作用。采用正交试验,获得Opr F菌株的最佳表达条件与培养条件。结果 Opr F重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果与预测一致。Western blot检测表明抗体能与Opr F蛋白结合。Opr F蛋白对小鼠保护率达64.29%。Opr F菌株最佳诱导表达条件为:加IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时菌液OD600值1.0,温度32℃,诱导时间8 h;最佳培养条件为:转速230 r/min,葡萄糖浓度为0%,装液量50 ml。结论获得Opr F表达菌株最佳的表达条件与培养条件;验证Opr F蛋白对小鼠PA感染有免疫保护作用。
【作者单位】： 陕西理工学院维生素D生理与应用研究所;
【关键词】： 外膜蛋白F 免疫保护 正交试验 诱导条件
【基金】：陕西省教育厅科学研究计划项目(No:2013JK0723)
【分类号】：R378
【正文快照】： 表1 Opr F菌株培养条件正交试验不同因子的表达水平因子代号水平1 2 3葡萄糖浓度/%a 0 0.4 1摇床转速/(r/min)b 180 200 230装液量/ml c 50 75 100表2 Opr F诱导表达条件正交试验不同因子的表达水平因子代号水平1 2 3加IPTG菌OD600值e 0.5 0.8 1IPTG终浓度/mmol f 0.1 0.3 0.5
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