空肠弯曲菌peb1A与大肠埃希菌ltB基因融合基因的构建、表达及鉴定

发布时间：2017-07-14 18:27

  本文关键词：空肠弯曲菌peb1A与大肠埃希菌ltB基因融合基因的构建、表达及鉴定

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【摘要】：目的采用重叠PCR方法将大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位ltB基因和空肠弯曲菌外膜蛋白peb1A基因进行连接,构建ltB-peb1A融合基因原核表达系统,对其进行诱导表达与鉴定。方法利用PCR技术扩增ltB与peb1A基因,用重叠PCR法将ltB与peb1A基因进行融合,然后插入pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A。用重组体转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白LTB-PEB1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,ELISA法鉴定其与牛Gm1活性,Western blot鉴定重组蛋白的反应原性。结果 PCR及测序证实ltB-peb1A融合基因原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A构建成功,SDS-PAGE分析目的蛋白最高表达量占全菌总蛋白的28%左右,其分子质量单位为40.7ku。ELISA法鉴定纯化的重组蛋白与牛Gm1有结合活性,Western blot分析重组蛋白能被兔抗空肠弯曲菌识别。结论成功构建了ltB-peb1A融合基因原核表达载体,并获得高效表达的目的蛋白,为空肠弯曲菌黏膜免疫疫苗的研制奠定了基础。
【作者单位】： 遵义医学院珠海校区贵州省免疫学研究生教育创新基地;
【关键词】： PebA基因 ltB基因 大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位 原核表达 黏膜佐剂 基因融合
【基金】：贵州省教育厅自然科学研究项目(No.20090105)
【分类号】：R392
【正文快照】： 空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是一种重要的人畜共患病病原菌,自20世纪80年代起,世界卫生组织已将空肠弯曲菌病列为最常见的肠道传染病之一[1-2]。该菌与格林-巴利综合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)、反应性关节炎(reactive arthritis,RA)的发病密切相关[3]。临床上对

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本文编号：542213