轮状病毒腹泻婴儿肠道微生态变化的研究

发布时间：2017-07-15 10:11

  本文关键词：轮状病毒腹泻婴儿肠道微生态变化的研究

  更多相关文章： 轮状病毒感染腹泻 DGGE 多样性 优势菌群 乳酸杆菌属 双歧杆菌属

【摘要】：轮状病毒(rotavirus, RV)感染腹泻是引起世界范围内婴幼儿重症腹泻的主要原因,在发展中国家每年有60万婴幼儿由于RV感染腹泻引起脱水,甚至死亡。该疾病对婴幼儿的健康,生长发育乃至生命都造成严重影响。RV引起腹泻是通过扰乱肠道黏膜细胞的吸收,使得肠道微生态平衡失调,肠道功能发生紊乱而造成的。腹泻导致肠道菌群失调,而菌群失调又诱发或加重腹泻。因此理清腹泻时肠道菌群状况对预防和治疗RV感染腹泻意义深远。本研究通过对婴儿粪便中微生物的分析探讨了RV病毒感染腹泻婴儿肠道微生态的变化,揭示了肠道微生态在婴儿RV感染腹泻疾病中的作用。 本试验以2011年1-3月间哈尔滨市儿童医院确诊的15例RV感染腹泻婴儿(RV腹泻组)和15例健康婴儿(对照组)为研究对象,利用试剂盒法提取婴儿粪便DNA,利用调查问卷方式收集婴儿生长发育和患病情况信息,采用细菌的16S rDNA V3区通用引物、乳酸杆菌属专一性引物和双歧杆菌属专一性引物对粪便总DNA进行PCR扩增,扩增产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析,利用Quantity One软件对RV感染腹泻婴儿的肠道菌群进行聚类和相似性分析,利用Shannon-Weaver指数对肠道菌群进行生物多样性分析,利用基因测序技术和Quantity One软件对RV感染腹泻婴儿肠道微生物进行定性和定量分析。 研究结果表明：RV腹泻组和对照组的肠道优势菌群多样性存在明显差异(P0.05),且RV腹泻组的多样性低于对照组,表明RV腹泻对肠道菌群多样性存在一定影响。RV腹泻婴儿肠道中拟杆菌属、梭菌属、肠杆菌属、屎肠球菌和大肠杆菌属占优势。与对照组比,乳酸菌属、双歧杆菌属和消化球菌属在RV感染腹泻婴儿的肠道中不占优势,说明RV感染腹泻后婴儿肠道优势菌群的组成发生变化。 RV腹泻组和对照组肠道乳酸杆菌属的多样性存在明显差异(P0.05),且RV腹泻组的多样性低于对照组,表明RV腹泻对乳酸杆菌属的多样性存在一定影响。RV腹泻组乳酸杆菌属的组成为：短乳酸杆菌、植物乳酸杆菌和发酵乳酸杆菌。和对照组相比,嗜热乳酸杆菌和植物乳酸杆菌不是RV腹泻组肠道乳酸杆菌属的优势种,说明RV感染腹泻后婴儿肠道菌种乳酸杆菌属的组成发生了变化。 RV腹泻组和对照组肠道双歧杆菌属的多样性存在明显差异(P0.05),且RV腹泻组的多样性低于对照组,表明RV腹泻对双歧杆菌属的多样性存在一定影响。RV腹泻组双歧杆菌属的组成为：短双歧杆菌和青春双歧杆菌。和对照组相比,婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌和短双歧杆菌不是RV腹泻组肠道双歧杆菌属的优势种,说明RV感染腹泻后婴儿肠道菌种双歧杆菌属的组成发生了变化。
【关键词】：轮状病毒感染腹泻 DGGE 多样性 优势菌群 乳酸杆菌属 双歧杆菌属
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378
【目录】：

• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 1 引言11-21
• 1.1 轮状病毒感染腹泻的研究进展11-12
• 1.1.1 轮状病毒概述11
• 1.1.2 致病机理11-12
• 1.1.3 临床症状12
• 1.2 婴儿肠道微生物研究概述12-17
• 1.2.1 婴儿肠道微生物的分布与组成12-16
• 1.2.2 婴儿肠道微生物的主要功能16-17
• 1.3 微生物分子生态学主要技术简介17-20
• 1.3.1 16S rRNA 序列分析原理17-18
• 1.3.2 目的基因的 PCR 扩增18
• 1.3.3 变形梯度凝胶电泳技术18-20
• 1.4 课题来源20
• 1.5 本研究的目的与意义20-21
• 2 材料与方法21-28
• 2.1 实验材料21-22
• 2.1.1 研究对象21
• 2.1.2 主要试剂21-22
• 2.1.3 仪器与设备22
• 2.2 实验方法22-28
• 2.2.1 粪便样本总 DNA 的提取22-23
• 2.2.2 RV 感染腹泻婴儿 16SrRNA-V3 区 PCR 及 DGGE（变性梯度凝胶电泳）分析23-25
• 2.2.3 RV 感染腹泻婴儿乳酸杆菌属专一片段 PCR 扩增及 DGGE 分析25-26
• 2.2.4 RV 感染腹泻婴儿双歧杆菌属专一片段 PCR 扩增及 DGGE 分析26-27
• 2.2.5 RV 感染腹泻婴儿 DGGE 条带测序分析27
• 2.2.6 数据分析27-28
• 3 结果与分析28-48
• 3.1 调查结果统计28-29
• 3.2 RV 感染腹泻婴儿肠道菌群的多样性29-33
• 3.2.1 RV 感染腹泻婴儿 16S rDNA V3 区 PCR 扩增29
• 3.2.2 RV 感染腹泻婴儿肠道菌群的多样性分析29-33
• 3.3 RV 感染腹泻婴儿肠道优势菌群分析33-36
• 3.3.1 RV 感染腹泻婴儿 DGGE 优势条带的测序分析33-35
• 3.3.2 RV 感染腹泻婴儿肠道优势菌群组成分析35-36
• 3.4 RV 感染腹泻婴儿肠道乳酸杆菌属的分析36-41
• 3.4.1 RV 感染腹泻婴儿肠道乳酸杆菌属的 PCR 扩增36
• 3.4.2 RV 感染腹泻婴儿肠道乳酸杆菌属的多样性分析36-39
• 3.4.3 RV 病毒感染腹泻婴儿肠道乳酸杆菌属的测序分析39-40
• 3.4.4 RV 感染腹泻婴儿肠道乳酸杆菌属组成分析40-41
• 3.5 RV 感染腹泻婴儿肠道双歧杆菌属的分析41-48
• 3.5.1 RV 感染腹泻婴儿肠道双歧杆菌属的 PCR 扩增41-42
• 3.5.2 RV 感染腹泻婴儿肠道双歧杆菌属的多样性分析42-45
• 3.5.3 RV 感染腹泻婴儿肠道双歧杆菌属的测序分析45-46
• 3.5.4 RV 感染腹泻婴儿肠道双歧杆菌属组成分析46-48
• 4 讨论48-53
• 4.1 RV 感染腹泻疾病与肠道菌群之间的关系48
• 4.2 RV 感染腹泻婴儿肠道菌群多样性分析48-49
• 4.3 RV 感染腹泻婴儿肠道优势菌群分析49-50
• 4.4 RV 感染腹泻婴儿肠道乳酸杆菌属分析50-51
• 4.4.1 RV 感染腹泻婴儿肠道乳酸杆菌属多样性分析50
• 4.4.2 RV 感染腹泻婴儿肠道乳酸杆菌属组成分析50-51
• 4.5 RV 感染腹泻婴儿肠道双歧杆菌属分析51-53
• 4.5.1 RV 感染腹泻婴儿肠道双歧杆菌属多样性分析51
• 4.5.2 RV 感染腹泻婴儿肠道双歧杆菌属组成分析51-53
• 5 结论53-54
• 致谢54-55
• 参考文献55-61
• 附录61-63
• 攻读硕士期间发表的论文63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 何英;;新生儿轮状病毒肠道外感染32例临床分析[J];中国儿童保健杂志;2009年04期

2 楼金s，

本文编号：543405