IκBα低表达转基因小鼠的建立及其表达调控

发布时间：2017-07-15 11:19

  本文关键词：IκBα低表达转基因小鼠的建立及其表达调控

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【摘要】：目的构建IκBα低表达转基因小鼠并分析IκBα的表达调控机制,为体内考察IκBα基因的整体效应提供基础。方法构建转基因构件RV-IκBα-Loxp-Mut-Neo载体,将线性化载体电转入胚胎干细胞,Southern blot筛选阳性克隆,再将阳性克隆进行显微囊胚注射,获得嵌合鼠,嵌合鼠与C57BL/6N交配获得F1代杂合型IκBα knockin小鼠。纯合型IκBα knockin小鼠与Ella Cre鼠杂交,其后代自交获得删除Loxp位点区间的IκBα knockout纯合型小鼠,PCR分别鉴定基因型。Western blot检测转基因小鼠各器官IκBα的表达情况,以正常野生C57/B6小鼠为对照。结果经PCR方法鉴定得到IκBα knockin和IκBα knockout转基因小鼠;Western blot结果显示与野生型小鼠相比,F2代IκBα knockin纯合型小鼠的脾、胸腺、肺等器官中IκBα的表达量降低,在IκBα knockin杂合型小鼠中,除上述器官外,皮肤、鼻咽、胃等器官中突变型染色单体IκBα的表达量也比野生型低;F2代IκBα knockout小鼠多数器官中IκBα的表达量低于正常野生C57/B6小鼠。结论成功建立了在多数器官低表达IκBa的转基因鼠;其中κB位点可能参与调控胸腺、脾、肺、鼻咽、皮肤、胃等器官中IκBa的表达,而其上游3 kb调控序列可能参与调控肝、鼻咽、胃、胰腺、小肠等器官中IκBa的表达。
【作者单位】： 南方医科大学肿瘤研究所;
【关键词】： IκBα 低表达 转基因 调控机制
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:31070773)
【分类号】：Q78;R-332
【正文快照】： IκBα是核因子NF-κB蛋白家族的最主要抑制剂,能直接决定NF-κB通路激活与否,因此IκBα可以作为研究NF-κB通路的靶点[1]。研究发现肿瘤、发炎性疾病、自身免疫性疾病、败血性休克、病毒感染等多种疾病中均有NF-κB通路的不恰当激活[2-3]。我们设想是否能建立一种由于IκBα

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本文编号：543639