3T3-fGFP细胞摄取神经干细胞胞外泌囊泡的途径

发布时间：2017-07-18 05:27

  本文关键词：3T3-fGFP细胞摄取神经干细胞胞外泌囊泡的途径

  更多相关文章： 小鼠神经干细胞 胞外囊泡 T-fGFP细胞 网格蛋白介导通路

【摘要】：目的以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路。方法分别用超速离心法获得胞外囊泡(EV)和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体(EXO);用透射电镜和原子力显微镜分别对两种样品进行形态学比较;用SDS-PAGE和Western blot分别对两种样品进行生物化学比较;用染料标记超速离心法获得胞外囊泡;将标记的胞外囊泡与3T3-fGFP细胞共孵育,对3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡进行研究;通过药理实验筛选3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡的主要通路。结果 C17.2细胞生长良好,形态规则未出现明显分化现象。在透射电镜下两种样品均观察到圆形双层膜结构和"杯状"外形的囊泡,直径分布多集中在300 nm以内,并且发现胞外囊泡的平均直径大于外泌体。原子力显微镜的结果显示,两种样品的高度分布多集中在2~20 nm以内,直径分布多集中在300 nm以内,并且外泌体的平均高度和平均直径均大于胞外囊泡。SDS-PAGE结果显示两种样品所含蛋白种类、表达丰度接近。在相同上样量下HSP70的表达强度两者接近,但CD63、CD9和CD81 3种蛋白在胞外囊泡中表达更强。摄取实验表明C17.2细胞胞外囊泡可以被3T3-fGFP细胞内化,被包裹在囊泡内,转运到细胞核周围的区域,并且摄取数量随着时间延长而增加(P0.05)。通过药理实验确定网格蛋白(Clathrin)介导的内吞通路为3T3-f GFP细胞摄取C17.2细胞胞外囊泡的主要通路。结论小鼠神经干细胞外泌体可能主要经网格蛋白介导的通路参与了神经干细胞与3T3-fGFP细胞的通讯。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院全军眼科中心视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室;
【关键词】： 小鼠神经干细胞 胞外囊泡 T-fGFP细胞 网格蛋白介导通路
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973计划,2013CB967002)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 针对视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)等不可逆性感光细胞死亡所导致的视功能障碍,目前研究较多的治疗方法有视网膜细胞移植、基因治疗、干细胞移植研究等,但仍然无有效的治疗手段。神经干细胞移植为目前最有前景的治疗方法之一,但作用机制仍不清楚。过去认为干细胞的

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈纤;蒋友芹;尹晓明;田文倩;王敬东;杨红英;;外泌体—电离辐射诱导旁效应的另一种机制[J];辐射研究与辐射工艺学报;2014年03期

2 胡国文;李青;牛鑫;胡斌;刘鹃;沈晓黎;汪泱;邓志锋;;旋转超滤:一种提取细胞外泌体的新方法[J];第二军医大学学报;2014年06期

3 黄楷森;刘微;黄德嘉;;外泌体在心血管疾病领域的研究现状[J];国际心血管病杂志;2014年04期

4 Jian Zhang;Sha Li;Lu Li;Meng Li;Chongye Guo;Jun Yao;Shuangli Mi;;Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2015年01期

5 张卓远;李龙江;;微泡的研究进展[J];临床口腔医学杂志;2013年08期

6 PENG LiNa;LI YuJiao;ZHANG Lan;YU WenQiang;;Moving RNA moves RNA forward[J];Science China(Life Sciences);2013年10期

7 郭杏丹;贺修胜;吴冬梅;文容;;Exosomes在肿瘤发展与转移中的研究进展[J];临床与实验病理学杂志;2013年12期

8 韩新生;张卓远;黄怡;夏翼超;李龙江;;舌鳞状细胞癌细胞与正常黏膜细胞微泡的差异蛋白组学研究[J];华西口腔医学杂志;2014年03期

9 Gabriella Pocsfalvi;Christopher Stanly;Annalisa Vilasi;Immacolata Fiume;Rosarita Tatè;Giovambattista Capasso;;Employing extracellular vesicles for non-invasive renal monitoring:A captivating prospect[J];World Journal of Clinical Urology;2014年02期

10 赵晨阳;孙维佳;张鹏飞;常彦忠;李英贤;;Exosomes的生物学特征及其在细胞间信号转导中的作用[J];生物物理学报;2013年12期

中国博士学位论文全文数据库 前8条

1 郝彦哲;慢病毒介导siRNA和细胞内抗病毒因子对HIV抑制作用研究[D];北京工业大学;2013年

2 张一;李斯特菌感染的巨噬细胞来源的微颗粒在树突状细胞介导的获得性免疫中的作用[D];华中科技大学;2013年

3 余磊;跨膜型TGF-β1基因修饰的骨髓未成熟树突状细胞来源的exosomes对小鼠自身免疫性脑脊髓炎的治疗效果及其机制研究[D];浙江大学;2013年

4 荣磊;乳腺癌细胞释放的EXO在机体肿瘤免疫反应中的初步研究[D];南方医科大学;2014年

5 张莹莹;不稳定心绞痛患者循环miR-223水平与抗血小板药物治疗期间血小板反应性的相关研究[D];天津医科大学;2014年

6 姜小良;藤黄酸对肾癌细胞的抑制作用研究[D];重庆医科大学;2014年

7 刘瑞琪;血清外泌体分离鉴定及其内含物与帕金森病关联研究[D];中南大学;2014年

8 张顺华;猪不同泌乳期乳汁Exosome中microRNA转录组的鉴定和表达谱分析[D];四川农业大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 孙祯;肠系膜淋巴结固有exosome的制备及其对异体淋巴细胞增殖的影响[D];第三军医大学;2013年

2 柏云;足细胞分泌的微囊泡对肾小管上皮细胞作用研究[D];第二军医大学;2013年

3 王哲;食管腺癌患者血液中外排小体微小RNA的研究[D];河北医科大学;2014年

4 张云芳;新型血清小RNA的发现及其在机体活动性感染中的研究[D];安徽大学;2014年

5 张月静;miR-21-4T1细胞的构建及其exosome功能的初步研究[D];河北医科大学;2014年

6 陈纤;外泌体—电离辐射诱导旁效应的另一种机制[D];苏州大学;2014年

7 陈磊;SD大鼠骨髓间充质干细胞来源的Exosomes在大鼠心梗后的血管再生研究[D];苏州大学;2014年

8 陈东昌;慢性心力衰竭患者血清miRNAs及血红素氧合酶-1的变化及意义[D];山东大学;2014年

9 郭杏丹;鼻咽癌中STGC3基因与mTOR通路相关蛋白质表达分析及意义[D];南华大学;2014年

10 刘扬;干扰素-α诱导肝非实质细胞分泌外体（exosomes）mRNA和miRNA表达谱的初步研究[D];复旦大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘暌,王忠诚,张亚卓;神经干细胞研究现状及应用展望[J];中华神经外科杂志;2000年06期

2 刘辉,杨树源;神经干细胞及其临床应用前景[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2000年01期

3 刘泉开;神经干细胞研究进展[J];现代诊断与治疗;2000年05期

4 李劲涛,冯忠堂,王廷华;成年脑内神经干细胞的研究进展[J];神经解剖学杂志;2001年04期

5 杨树源,只达石,王宁;积极开展神经干细胞的研究[J];中华神经外科杂志;2001年05期

6 丁英,曾园山;神经干细胞的特性及其在修复脊髓损伤中的应用前景[J];解剖学研究;2001年04期

7 李巍,蔡文琴,姚忠祥;大鼠基因工程化神经干细胞的建立[J];四川解剖学杂志;2001年01期

8 孙石磊,赵虎;神经干细胞及其应用[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2001年05期

9 黄海花;神经干细胞研究的新进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2001年06期

10 左明雪;神经干细胞——治疗脑神经性疾病的希望(1)[J];生物学通报;2002年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 魏勇;应大君;张伟;董世武;;幼龄家猪脑SVZ神经干细胞的分离与鉴定[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

2 李力;万琪;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年

3 李力;万琪;刘永红;张巍;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年

4 黄兵;司银楚;;成年动物脑内神经干细胞的分化调控机制[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2004年

5 吴承远;朱树干;;加强神经干细胞内移植治疗中枢神经系统疾病的研究[A];中国医师协会神经外科医师分会首届全国代表大会论文汇编[C];2005年

6 杨小锋;郑学胜;刘伟国;冯军峰;胡未伟;李谷;罗鸣;陈向日;;神经干细胞团的悬浮不稳定性及其解决方法[A];2005年浙江省神经外科学术会议论文汇编[C];2005年

7 于龙刚;李娜;姜彦;解凤阳;张晓雯;;猫胚胎源性神经干细胞的分离、培养及鉴定的研究[A];全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2012年

8 夏立广;李仲荣;刘淼清;王永飚;朱利斌;赵一鸣;;两种不同来源神经干细胞的神经递质表达研究[A];2013年浙江省医学会小儿外科学学术年会暨分会成立30周年庆典论文汇编[C];2013年

9 李文涛;;中医药对神经干细胞增分化作用的研究现状[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年

10 徐富翠;梅欣明;杨晓红;;神经干细胞培养影响因素探讨[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 胡德荣;“抑制蛋白”可控制神经干细胞提前分化[N];健康报;2007年

2 孙国根　白毅;灵长类脑内神经干细胞被发现[N];中国医药报;2011年

3 孙国根;阻碍卒中后神经干细胞再生的“元凶”被发现[N];中国医药报;2013年

4 ;我国科学家成功地在体外培养出神经干细胞[N];中国高新技术产业导报;2001年

5 沈丽 付钰;神奇的神经干细胞[N];科技日报;2002年

6 时仲省 高思敏 刘春阳;河南医大成功培养人胚神经干细胞[N];中国医药报;2001年

7 梓华;神经干细胞可治恶性脑癌[N];医药经济报;2002年

8 许琦敏;脑损伤修复治疗又有新希望[N];文汇报;2007年

9 北京市神经外科研究所 北京天坛医院 王忠诚邋院士;神经修复的生力军——神经干细胞[N];健康报;2008年

10 孙国根;神经干细胞并非“全能制造者”[N];中国医药报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 郭立云;猕猴胚胎源性神经干细胞诱导、脑内移植及其在青光眼玻璃体内的转归—探索性研究[D];昆明医科大学;2013年

2 任永娟;材料调控神经干细胞的研究[D];清华大学;2009年

3 曹翠丽;大鼠神经干细胞的体外培养及向神经元的诱导分化[D];河北医科大学;2005年

4 周虎田;骨髓源神经干细胞生物学特性的研究[D];第一军医大学;2005年

5 段发亮;神经干细胞培养、增殖、迁移和分化的研究[D];第一军医大学;2005年

6 许汉鹏;中枢神经系统多潜能神经干细胞体外培养模型的建立及其细胞学特性的初步研究和体内移植实验[D];第四军医大学;2000年

7 高剑峰;海马神经干细胞增生分化及影响因素[D];郑州大学;2010年

8 高峰;小鼠神经干细胞免疫原性的研究[D];浙江大学;2010年

9 王霞;酒精对胎鼠脑新皮质神经干细胞自我更新和分化的影响研究[D];复旦大学;2010年

10 朱炳;CXCL12\CXCR4\CXCR7在人神经干细胞中的抗凋亡功能和机制[D];浙江大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王轩;细胞外钾离子对体外培养神经干细胞凋亡和分化的影响及其机制的研究[D];第四军医大学;2008年

2 吕艳玲;胚胎大鼠海马神经干细胞的扩增及其与三维微小凹图式复合的研究[D];重庆大学;2010年

3 汪立平;新生大鼠神经干细胞体外培养与诱导分化的研究[D];苏州大学;2004年

4 武孔彦;神经干细胞纹状体内移植后的行为和功能研究[D];华东师范大学;2006年

5 戴明舒;神经干细胞代谢参数的测定及其模型研究[D];大连理工大学;2006年

6 游晓青;神经干细胞体外增殖与分化的部分影响因子探讨[D];福建医科大学;2003年

7 吴蕾;雌激素对大鼠神经干细胞的影响及其作用机制[D];安徽医科大学;2003年

8 高安慧;去甲肾上腺素对胎鼠室下带神经干细胞的作用研究[D];华东师范大学;2004年

9 程卓;氧化应激诱导神经干细胞自噬发生的实验研究[D];吉林大学;2012年

10 樊明超;人胚胎纹状体来源神经干细胞体外培养生物学特性[D];青岛大学;2010年

，

本文编号：556207