hBMP-2基因转染对Hucb-MSC及软骨细胞影响的实验研究

发布时间：2017-07-20 00:06

  本文关键词：hBMP-2基因转染对Hucb-MSC及软骨细胞影响的实验研究

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【摘要】：目的探讨脂质体介导重组质粒pIRES2-EGFP-hBMP-2基因转染脐血间充质干细胞和人软骨细胞的可行性。 方法利用密度梯度离心法和贴壁培养法分离脐血,获取并培养间充质干细胞,流式细胞仪鉴定,X-treme GENE转染试剂介导重组质粒pIRES2-EGFP-hBMP-2转染第3代细胞,观察EGFP的表达情况,分别收集第12、24、36、48、60、72、84、96h细胞培养上清,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中hBMP-2蛋白含量,免疫荧光检测细胞内蛋白表达。转染后2周,行免疫组化检测细胞的变化。重组质粒pIRES2-EGFP-hBMP-2转染人软骨细胞,观察细胞变化。结果密度梯度离心法与贴壁培养法可以分离获取人脐血间充质干细胞,流式细胞仪鉴定表面标记CD90, CD105高表达,不表达CD34, CD45.脂质体介导重组质粒pIRES2-EGFP-hBMP-2可成功转染人脐血间充质干细胞,转染率为27.7%±7.59%。ELISA检测到较高浓度的hBMP-2蛋白质分泌,与对照组相比,具有显著性差异(p＜0.01)。免疫荧光可检测到hBMP-2蛋白形成。免疫组化检测显示部分细胞Ⅱ型胶原蛋白表达阳性。转染后软骨细胞传代次数增加。 结论hBMP-2基因可以有效转染人脐血间充质干细胞,标记基因和目的基因可在细胞中表达,有hBMP蛋白质分泌,并可促进其表达Ⅱ型胶原蛋白。hBMP-2可维持软骨细胞表型,并促进其传代增殖。
【关键词】：脐血间充质干细胞 骨形成蛋白 软骨细胞
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 材料和方法8-19
• 1.1 实验材料8
• 1.2 主要试剂8
• 1.3 主要仪器8-9
• 1.4 实验前准备9-10
• 1.5 主要实验方法10-19
• 1.5.1 hBMP-2基因转染人脐血间充质干细胞11-16
• 1.5.1.1 脐血间充质干细胞的分离11
• 1.5.1.2 脐血间充质干细胞的原代培养11
• 1.5.1.3 脐血间充质干细胞的传代培养11-12
• 1.5.1.4 流式细胞仪鉴定细胞表型12
• 1.5.1.5 基因转染脐血间充质干细胞12-13
• 1.5.1.6 酶联免疫吸附试验检测BMP-2蛋白表达量13-15
• 1.5.1.7 BMP-2蛋白免疫荧光检测15-16
• 1.5.1.8 细胞免疫组织化学Ⅱ型胶原检测16
• 1.5.2 hBMP-2基因转染人软骨细胞16-19
• 1.5.2.1 人软骨细胞的分离培养16-17
• 1.5.2.2 人软骨细胞传代培养17
• 1.5.2.3 人软骨细胞的Ⅱ型胶原检测17-18
• 1.5.2.4 人软骨细胞的基因转染18-19
• 第二章 实验结果19-22
• 2.1 hBMP-2基因转染人脐血间充质干细胞19-20
• 2.2 hBMP-2基因转染人软骨细胞20-22
• 第三章 讨论22-27
• 3.1 人脐血间充质干细胞22-24
• 3.2 人软骨细胞24-27
• 结论27-28
• 附图28-37
• 参考文献37-42
• 综述42-56
• 参考文献49-56
• 攻读学位期间的研究成果56-57
• 致谢57-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：565402