云南省澜沧江流域蚊虫及蚊媒病毒调查研究

发布时间：2017-07-20 08:02

  本文关键词：云南省澜沧江流域蚊虫及蚊媒病毒调查研究

  更多相关文章： 澜沧江 蚊虫 虫媒病毒 病毒分离 系统进化分析

【摘要】：云南省是我国蚊类区系和物种分布的核心地带和关键地区，也是我国蚊媒传染病较多的省份。迄今为止，在云南从蚊虫中分离并已鉴定的病毒包括5个病毒科11种病毒，包括披膜病毒科甲病毒属的辛德毕斯病毒、基孔肯雅病毒、盖塔病毒，黄病毒科黄病毒属的乙脑病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）、登革病毒（Dengue virus，DENV），呼肠孤病毒科的云南环状病毒（Yunnan orbivirus，YUOV）、Colti病毒、Kadipiro病毒、版纳病毒（Banna virus，BAV），细小病毒科浓核病毒属的浓核病毒，布尼亚病毒科布尼亚病毒属的巴泰病毒。在云南已从15种蚊虫中分离到乙脑病毒。澜沧江在云南省境内1247km，纵贯云南南北。流域面积约90000km2，是我国蚊类区系和蚊种分布的核心地带和关键地区之一。以往开展蚊虫及蚊媒病毒的调查多集中于滇西南边境地区，在滇西北地区开展的调查较少。随着全球气候变暖、人口流动增加、人们的生产生活方式改变以及澜沧江－湄公河国际航运的开通，有必要对云南省澜沧江流域蚊虫分布及其与疾病的关系进行系统的调查研究。 2007-2009年，在云南省澜沧江上、中、下流域共选择10个居民点进行蚊虫分布调查，在蚊虫密度高峰季节，采用诱蚊灯法在畜圈和人房内进行夜间捕蚊。并于2010年，在下游地区村寨竹林采集伊蚊。对采集的蚊虫标本用白纹伊蚊C6/36细胞进行病毒分离、分子生物学鉴定和系统进化分析。同时收集疑似病人血清和脑脊液标本进行病毒分离和分子生物学鉴定。 调查结果显示，澜沧江流域居民点畜圈共采集到8属40种共计112344只蚊虫。其中构成比在前四位的蚊虫依次是三带喙库蚊（80.26%）、中华按蚊（8.35%）、环带库蚊（5.41%）和纹腿库蚊（2.42%），其余36种蚊虫的构成比均小于1.00%。在人房中共采集到7属32种4427只蚊虫，蚊虫构成比在前四位的蚊虫依次是三带喙库蚊（35.71%）、中华按蚊（27.51%）、纹腿库蚊（10.68%）、骚扰阿蚊（3.55%）。在上游地区畜圈中共采集到6属20种蚊虫，其中构成比在前四位的蚊虫依次是纹腿库蚊（36.47%）、三带喙库蚊（30.63%）、中华按蚊（14.85%）和昆明按蚊（11.63%）。人房中共采集到4属6种蚊虫，构成比在前四位的蚊虫依次是骚扰阿蚊（29.41%）、致倦库蚊（23.53%）、中华按蚊（17.65%）、多斑按蚊和白胸库蚊（11.76%）；在中游地区畜圈共采集到6属28种蚊虫，其中构成比在前四位的蚊虫依次是三带喙库蚊（84.03%）、中华按蚊（6.67%）、环带库蚊（5.49%）和纹腿库蚊（1.26%）。人房中共采集到5属20种蚊虫，构成比在前四位的蚊虫依次是三带喙库蚊（36.15%）、中华按蚊（29.09%）、纹腿库蚊（12.15%）、致倦库蚊（11.82%）；在下游地区畜圈共采集到7属35种蚊虫，其中构成比在前四位的蚊虫依次是三带喙库蚊（77.15%）、中华按蚊（12.53%）、环带库蚊（5.76%）和致倦库蚊（0.90%）。人房中共采集到6属25种蚊虫，排在前四位的蚊虫依是三带喙库蚊（33.59%）、致倦库蚊（19.69%）、中华按蚊（16.60%）、环带库蚊（8.49%）。 对云南澜沧江流域10个县采集到的共14706只193组蚊虫标本进行病毒分离，共获得55株有细胞病变的病毒分离物，对11份脑脊液标本、23份发热病人血清进行病毒分离，获得1株有细胞病变的病毒分离物。 采用特异引物或通用引物对49株分离物进行RT-PCR鉴定，有40株分离物得到鉴定，仍有9株为未知分离物。40株分离物中包括5科（黄病毒科、披膜病毒科、呼肠孤病毒科、Toti病毒科、Mesoniviridae病毒科）8种病毒（乙脑病毒11株、库蚊黄病毒6株、伊蚊黄病毒6株、盖塔病毒5株、版纳病毒3株、云南环状病毒5株、Toti病毒6株、Alphamesonivirus1样病毒1株），其中蚊虫黄病毒、Toti病毒、Alphamesonivirus1样病毒为云南首次分离到。40株分离物中，有2株同时检测到BAV和Toti病毒、1株同时检测到库蚊黄病毒和Toti病毒。8种病毒主要来自三带喙库蚊、中华按蚊及白纹伊蚊。从三带喙库蚊中分离到7种病毒（JEV、BAV、YUOV、GETV、Alphamesonivirus1样病毒、库蚊黄病毒、Toti病毒），从中华按蚊中分离到3种病毒（JEV、GETV、库蚊黄病毒）。首次从老挝输入病例血清标本中分离到1株登革2型病毒。 11株JEV的蚊虫采集地区分布在云南澜沧江流域的上、中、下游地区，澜沧江上、中、下游地区三带喙库蚊乙脑病毒的最低感染率分别为24.63/万、7.15/万和9.02/万。新分离JEV的外膜蛋白（E）基因核苷酸相似性为98.0%～100.0%，氨基酸同源性为99.8%～100.0%，与我国乙脑减毒活疫苗株SA14-14-2的核苷酸相似性为86.1%～86.9%，氨基酸相似性为96.8%～97.2%。系统进化分析显示，新分离10株JEV均属于基因Ⅰ型。 从澜沧江上、中、下游地区采集的三带喙库蚊、中华按蚊和白纹伊蚊及未分类伊蚊中鉴定到12株黄病毒。对12株黄病毒部分非结构蛋白5（NS5）基因进行进化分析，库蚊和按蚊与伊蚊分离到的病毒分别位于不同的分枝，库蚊和按蚊中分离到的病毒与库蚊黄病毒（Culex flavivirus，CxFV）进化关系相近，而从伊蚊中分离到的黄病毒与CFA病毒（Cell fusing agent virus，CFA）和Kamiti河病毒（Kamiti River virus，KRV）相近，但位于不同分枝中。 在澜沧江中游地区采集的三带喙库蚊中首次分离到6株Toti病毒。对该病毒编码RNA依赖的RNA聚合酶基因的部分氨基酸进行进化分析显示，新分离Toti病毒和尚未分类的病毒Omono River virus AK4株和ToV-TJ株同在一个进化分支。属于Totivirus病毒科尚未分类病毒。 在澜沧江中游地区采集的三带喙库蚊中首次分离到1株Alphamesonivirus1样病毒,命名为NDiV-NJ8-09。系统进化树显示，新分离株NDiV-NJ8-09与NDiV02VN178和Cavally virus (CAVV)共同位于同一进化分枝，关系最近，属于套式病毒目(order Nidovirales) Mesoniviridae病毒科。 在澜沧江中游地区南涧县采集的三带喙库蚊中鉴定出3株BAV，在澜沧江下游地区采集的三带喙库蚊中鉴定到5株YUOV，在澜沧江上游和下游采集的三带喙库蚊和中华按蚊中鉴定到5株GETV。经BLAST比对显示，分别与以往在云南分离到的相应病毒具有很高的相似性。 对新分离的登革病毒MLDENV-09株E基因核苷酸序列进行进化分析，结果显示该病毒株位于2型登革病毒亚洲基因Ⅰ型拓扑群中。与2006年泰国株D2/Thailand/0606aTw的E基因核苷酸相似性为99.6%。 本研究首次在云南省澜沧江流域系统地进行了蚊虫和蚊媒病毒的流行病学调查，结果提示云南省澜沧江流域不仅存在蚊种的多样性分布，也同时存在蚊媒病毒的多样性。具体得出以下结论： 1.三带喙库蚊和中华按蚊在澜沧江上、中、下游地区畜圈中均是优势蚊种。三带喙库蚊和中华按蚊是澜沧江中、下游地区人房中的优势蚊种。该地区蚊虫种类从高纬度地区向低纬度地区逐渐增多。 2.三带喙库蚊是自然感染病毒种类最多的蚊种，从三带喙库蚊中分离到7种病毒（JEV、BAV、YUOV、GETV、Alphamesonivirus1样病毒、库蚊黄病毒、Toti病毒）。其次，从中华按蚊中分离到3种病毒（JEV、GETV、库蚊黄病毒）。本次调查提示澜沧江流域居民点广泛存在虫媒病毒性疾病的媒介。 3.在云南首次从三带喙库蚊中分离到蚊虫黄病毒、 Toti病毒和Alphamesonivirus1样病毒，它们的生物学性状与人类疾病关系需进一步研究。 4.在澜沧江中游地区分离到BAV，结合以往调查数据，提示BAV在整个澜沧江流域均有分布。JEV在澜沧江流域广泛分布。由于这两种病毒与人类疾病关系密切，提示应加强居民点蚊虫媒介控制措施，以确保居民健康。 5. GETV是导致家畜疾病的病原，，本次调查提示该病毒在整个澜沧江流域均有分布，提示畜牧部门在相应地区应注意对该疾病的防控。 6.首次从邻国老挝输入病例中分离到2型登革病毒。提示应加强云南边境地区出入境人员登革热监测和疑似病人管理，避免因输入而造成本地登革热暴发流行。
【关键词】：澜沧江 蚊虫 虫媒病毒 病毒分离 系统进化分析
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373
【目录】：

• 缩略词表4-5
• 摘要5-9
• Abstract9-14
• 前言14-17
• 第一部分 云南省澜沧江流域蚊虫媒介调查17-26
• 材料与方法17-19
• 一、 调查地点与调查时间17-18
• 二、 蚊虫采集18-19
• 三、 蚊种鉴定19
• 结果19-25
• 一、 澜沧江流域蚊虫种类与构成19-20
• 二、 澜沧江不同流域蚊虫种类与构成20-25
• 讨论25-26
• 第二部分 云南省澜沧江流域蚊媒病毒的分离鉴定26-61
• 材料与方法26-32
• 一、 材料26-28
• 二、 方法28-32
• 结果32-56
• 一、 云南省澜沧江流域蚊媒病毒分离情况32-35
• 二、 黄病毒属病毒的分离鉴定35-41
• 三、 呼肠孤病毒科病毒的分离鉴定41-44
• 四、 盖塔病毒的分离鉴定44
• 五、 其他病毒的分离鉴定44-52
• 七、 病例标本病毒的分离鉴定52-56
• 讨论56-61
• 结论61-62
• 参考文献62-68
• 文献综述68-74
• 参考文献71-74
• 个人简历74-76
• 致谢76

【参考文献】

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本文编号：566951