前列地尔对体外培养类缺血再灌注模型视网膜神经节细胞的影响

发布时间：2017-07-20 18:12

  本文关键词：前列地尔对体外培养类缺血再灌注模型视网膜神经节细胞的影响

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【摘要】：目的：(1)观察前列地尔对体外培养类缺血再灌注模型视网膜神经节细胞(Retina ganglion cells, RGC)存活的影响；(2)探讨前列地尔对体外培养类缺血再灌注模型RGC的最佳作用浓度与作用时间；(3)探讨前列地尔对体外培养RGC类缺血再灌注损伤的保护作用机制。 方法：采用胰酶消化法原代培养出生3d内的Sprague-Dawley大鼠RGC,并将培养72h的RGC使用抗大鼠Thy-1单克隆抗体对培养的RGC进行鉴定。RGC培养48h后,将培养的RGC随机分为正常组、模型组、模型+前列地尔组。模型组建立RGC类缺血再灌注损伤模型,模型+前列地尔组在RGC缺血期及再灌注期均加入浓度分别为15μg·L-1、45μg·L-1、135μg·L-1前列地尔。观察前列地尔对体外培养类缺血再灌注模型RGC存活的影响,于RGC类缺血再灌注模型建立24h、48h、72h时应用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法分别测定各组细胞的吸光值(A值),并根据MTT法的测定结果确定前列地尔的最佳作用浓度与作用时间。采用荧光定量PCR方法分别测定正常组、模型组、模型+前列地尔组(最佳浓度组)各组细胞中Bax、Bcl-2的相对表达量。 结果：(1)RGC培养48h后,可见RGC伸出突起,随着培养时间的延长,细胞突起变长,部分细胞突起相互连接。(2)使用抗大鼠Thy-1单克隆抗体对RGC进行免疫细胞学检测,可见RGC胞浆及轴突染成棕黄色。(3)RGC类缺血再灌注模型建立24h、48h、72h时,模型组RGC的A值均明显降低,且分别与正常组、模型+前列地尔组比较,差异均有统计学意义(均为P0.05)。RGC类缺血再灌注模型建立24h时,模型+45μg·L-1前列地尔组A值与正常组差异无统计学意义(P0.05),同时15μg·L-1前列地尔组与135μg·L-1前列地尔组组间差异无统计学意义(P0.05),而正常组、模型+45μg·L-1前列地尔组分别与15μg·L-1前列地尔组、135μg·L-1前列地尔组比较,差异均有统计学意义(均为P0.05)。模型建立48h、72h时,正常组、模型+前列地尔组之间差异均无统计学意义(均为P0.05)。MTT法的测定结果表明前列地尔可减少类缺血再灌注RGC的死亡,且前列地尔对类缺血再灌注模型RGC的最佳作用浓度为45μg·L1,有效作用时间为类缺血再灌注模型建立24h。(4)使用荧光定量PCR方法分别测定各组RGC中Bax、Bcl-2的相对表达量：Bcl-2：正常组为0.999±0.035,模型组为0.657±0.012,模型+前列地尔(45μg·L-1)组为1.715±O.016(p0.05)；Bax:正常组为1.001±0.048,模型组为1.712±0.089,模型+前列地尔(45μg·L-1)组为1.508±0.061(P0.05)。 结论：(1)前列地尔对体外培养RGC类缺血再灌注损伤具有保护作用,前列地尔可减少类缺血再灌注RGC的死亡；(2)前列地尔可能通过上调RGC内Bcl-2的表达,同时下调Bax的表达,进而对类缺血再灌注RGC发挥保护作用。
【关键词】：前列地尔 原代培养 视网膜神经节细胞 类缺血再灌注 Bax Bcl-2
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R96
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料与方法10-16
• 结果16-22
• 讨论22-27
• 结论27-28
• 参考文献28-32
• 综述32-47
• 参考文献42-47
• 缩略词与中英文对照47-49
• 致谢49

【参考文献】

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本文编号：569324