蚊杀虫剂表皮抗性的初步研究

发布时间：2017-07-26 19:34

  本文关键词：蚊杀虫剂表皮抗性的初步研究

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【摘要】：背景：化学防制一直是蚊媒综合防治的主要方法。杀虫剂长期、大量使用,导致了蚊抗药性。本研究旨在探讨昆虫表皮蛋白(insect cuticle proteins, ICPs)和几丁质合成酶I (chitin synthase I, CHSI)在蚊抗药性中的作用。 方法：选择淡色库蚊抗药性蛋白质组与转录组共同鉴定的差异表达表皮蛋白；采用qRT-PCR方法,分别比较淡色库蚊实验室和现场种群的敏感与抗性品系的ICPs和CHSI表达差异；以溴氰菊酯诱导淡色库蚊,对诱导前后ICPs和CHSI的差异表达进行了定量检测；克隆主效基因Unigene3941_All全长序列,并进行同源性比对与进化树分析；采用基因微注射方法验证主效基因Unigene3941_All的功能。 结果：淡色库蚊实验室和现场种群敏感与抗性品系的14个表皮蛋白和几丁质合成酶Ⅰ存在差异表达；Unigene3941_All基因表达量的变化远大于其它13个表皮蛋白：Jnigene3941_All基因在敏感品系的表达占10.78%,而在抗性品系的表达则上升到73.95%；另13个表皮蛋白在敏感品系的表达占89.22%,而在抗性品系的表达则下降到26.05%；基因注射敲低Unigene3941_All基因的表达水平后,另13个表皮蛋白的表达量升高,结果蚊溴氰菊酯抗性下降,致死率增加；经溴氰菊酯诱导,表皮蛋白和几丁质合成酶Ⅰ的mRNA表达量均在诱导恢复12或24h后达到最高峰,随后表达量急剧下降；克隆获得Unigene3941_All基因全长序列为732bp, ORF区域长度为390bp,共编码129个氨基酸(GenBank/KF723314,2013). 结论：表皮蛋白和几丁质合成酶Ⅰ均与蚊杀虫剂抗性相关,可能共同形成了蚊杀虫剂表皮抗性；Unigene3941_All基因可能在抗药性中发挥主效作用；表皮蛋白家族参与杀虫剂抗性,可能存在某种内部调节机制。
【关键词】：淡色库蚊 溴氰菊酯 抗药性 表皮蛋白 几丁质合成酶Ⅰ
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R384.1
【目录】：

• 目录4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-31
• 实验材料12-15
• 1 实验蚊12-13
• 2 主要试剂13-14
• 3 主要仪器14-15
• 实验方法15-31
• 1 淡色库蚊种群选取15-16
• 2 淡色库蚊RNA提取和cDNA合成16-18
• 3 引物设计、合成18-19
• 4 实时荧光定量PCR反应19-21
• 5 诱导实验21
• 6 淡色库蚊Unigene3941_All基因克隆21-28
• 7 生物信息学分析28-29
• 8 基因微注射抑制Unigene3941_All基因表达后对蚊敏感性的影响29-30
• 9 统计分析30-31
• 结果31-53
• 1 蛋白质组和转录组中鉴定出的表皮蛋白31
• 2 表皮蛋白和几丁质合成酶Ⅰ在实验室抗性、敏感品系中的表达31-34
• 3 表皮蛋白和几丁质合成酶Ⅰ在现场抗性、敏感品系中的表达34-40
• 4 溴氰菊酯短期诱导表皮蛋白与几丁质合成酶Ⅰ表达分析40-45
• 5 淡色库蚊Unigene3941_All全长基因克隆与生物信息学分析45-46
• 6 基因微注射对淡色库蚊溴氰菊酯敏感性的影响46-53
• 讨论53-57
• 结论57-58
• 参考文献58-65
• 综述65-81
• 参考文献73-81
• 攻读学位期间发表文章情况81-82
• 致谢82-83

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 刘清明;苑园园;林健荣;钟杨生;;昆虫表皮蛋白及其基因表达调控机理的研究进展[J];昆虫知识;2010年02期

2 ;Cloning and Overexpression of CYP6F1,a Cytochrome P450 Gene,from Deltamethrin-resistant Culex pipiens pallens[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2005年05期

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本文编号：578028