EV71感染树突状细胞MAPK信号通路分子差异表达研究

发布时间：2017-07-27 08:20

  本文关键词：EV71感染树突状细胞MAPK信号通路分子差异表达研究

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【摘要】：目的：筛选树突状细胞（DCs）感染肠道病毒71型（EV71）前后丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路分子基因差异表达，阐明MAPK信号通路在EV71感染中的作用及效应机制，为预防和治疗EV71感染提供新的策略。 方法：(1)密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，贴壁2小时后去除悬浮细胞，加入含10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养基、重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、重组人白细胞介素-4(IL-4)的培养液诱导培养6天，流式细胞仪检测其表型，获得未成熟DCs；随后用EV71感染未成熟DCs，并检测感染后DCs表型。（2）采用qRT-PCR方法分别检测EV71感染前和感染2h及8h后DCs中MEK/ERK信号通路相关基因表达情况。（3）Western Blot检测MEK/ERK信号通路关键蛋白的磷酸化水平及EV71/VP1的表达量。 结果：（1）流式细胞技术检测培养第6天DCs表型，CD11c，HLA-DR表达率高达90%以上，CD80、CD86达60%以上，CD83表达率为19.9%，淋巴细胞型CD3低表达，是未成熟DCs的标志。EV71感染后DCs CD11c、HLA-DR依旧高表达，CD83、CD86表达较未感染DCs表达率高。（2）RT-PCR结果显示EV71感染DCs后IκB-α、IKKβ、IL-1α、IL-12、JUN、Fos、NF-ΚB1等基因表达明显上调；而MAP2K1、MAP2K2、MAPK1和MAPK3的mRNA表达量并未见明显变化。（3） Western Blot实验结果显示，ERK信号通路相关蛋白MEK1/2和核内转录因子c-Jun在EV71感染8h后磷酸化水平增高，ERK1/2在2h、8h和20h后分别呈现出增高、降低再增高的双相激活趋势。NF-κB蛋白磷酸化水平及EV71VP1蛋白表达量随感染时间延长而增加。 结论EV71感染DCs后，，可明显刺激DCs的成熟并双相激活MEK/ERK信号通路，以上结果说明MEK/ERK信号通路的激活与EV71感染有一定的相关性。活化后的MAPK能够参与细胞的增殖、凋亡、炎症反应等过程，可能为预防和治疗EV71感染提供新的思路。
【关键词】：肠道病毒71型 树突状细胞 丝裂原活化蛋白激酶 细胞因子
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373;R392.12
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 实验流程11-12
• 第一部分 DCs 的体外诱导、培养和鉴定12-20
• 1 材料12-13
• 2 方法13-15
• 3 结果15-18
• 4 讨论18-20
• 第二部分 EV71 感染树突状细胞 MEK/ERK 信号通路分子差异表达研究20-35
• 1 材料20-23
• 2 方法23-29
• 3 结果29-33
• 4 讨论33-35
• 结论35-36
• 参考文献36-40
• 综述一 树突状细胞 TLR7/8 信号通路机制的研究进展40-49
• 参考文献46-49
• 综述二 MAPK 信号转导通路与病毒性疾病关系研究进展49-58
• 参考文献55-58
• 中英文对照缩略词表58-60
• 攻读学位期间公开发表的论文60-61
• 致谢61-62

【参考文献】

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本文编号：580507