用于多模态分子影像含双报告基因的腺病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2017-07-28 14:19

  本文关键词：用于多模态分子影像含双报告基因的腺病毒载体的构建及鉴定

  更多相关文章： 腺病毒 转铁蛋白受体 荧光素酶 报告基因 分子影像

【摘要】：目的构建含有由人转铁蛋白受体基因（TFRC）和萤火虫荧光素酶基因（Luc）组成的双报告基因的重组腺病毒载体（Ad），为磁共振（MR）和生物发光双模态分子成像提供一个全新的实验工具。 方法从psiCHECK-2质粒中用聚合酶链式反应(PCR)扩增Luc基因，克隆入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV后行Nhe Ⅰ/Xba Ⅰ双酶切和测序鉴定。然后利用PCR扩增TFRC基因，克隆到pShuttle-CMV-CMV-Luc穿梭载体的多克隆位点区，进行Sfi Ⅰ酶切和测序鉴定，得到的重组穿梭载体pShuttle-TFRC-Luc再与腺病毒骨架载体（pAdeno）同源重组，然后将Xho Ⅰ酶切鉴定正确的重组病毒质粒经293细胞包装纯化并行PCR鉴定，测定其病毒滴度。用获得的重组腺病毒Ad-TFRC-Luc感染人结直肠癌LOVO细胞，转铁蛋白受体(TfR)和荧光素酶蛋白的表达分别用免疫蛋白印迹（western blot）、实时荧光定量PCR法和体外生物发光成像来检测。 结果转铁蛋白受体基因正确重组到携带有荧光素酶基因的腺病毒载体中，测序结果与GenBank序列完全一致，酶切鉴定结果显示均能得到与理论大小相符的2.3kb片段。Ad-TFRC-Luc重组腺病毒构建成功，，病毒滴度达1.6×10~(10)pfu/ml，感染LOVO细胞48小时后转铁蛋白受体和荧光素酶蛋白的表达水平显著增加，差异均有统计学意义（P0.01）。 结论Ad-TFRC-Luc重组腺病毒构建成功，可用于下一步的多模态活体成像示踪肿瘤生长、基因治疗以及移植干细胞。
【关键词】：腺病毒 转铁蛋白受体 荧光素酶 报告基因 分子影像
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R735.3;R3416
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-29
• 结果29-34
• 讨论34-36
• 结论36-37
• 附图37-49
• 参考文献49-52
• 文献综述52-57
• 综述参考文献55-57
• 致谢57-58
• 攻读学位期间发表的学术成果58-59
• 个人简历59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 廖继春;郜发宝;;磁共振肿瘤分子成像研究进展[J];国际医学放射学杂志;2010年04期

2 乔瑞瑞;曾剑峰;贾巧娟;杜军;沈琳;高明远;;磁性氧化铁纳米颗粒——通向肿瘤磁共振分子影像的重要基石[J];物理化学学报;2012年05期

3 文明;李少林;;磁共振成像用于分子影像学研究[J];中国医学影像技术;2007年01期

本文编号：584469