经MHCⅡ通路的屋尘螨1类变应原T细胞表位融合肽疫苗载体的构建与表达

发布时间：2017-07-29 17:23

  本文关键词：经MHCⅡ通路的屋尘螨1类变应原T细胞表位融合肽疫苗载体的构建与表达

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【摘要】：目的构建经MHCⅡ通路的屋尘螨1类变应原Der p 1的T细胞表位肽疫苗重组载体。方法分别合成TAT、Ih C和含编码Der p 1的3段T细胞表位的融合核苷酸序列,用特异性引物PCR扩增相应的基因片段,分别用相应的双酶切后,用T4 DNA连接酶连接形成TAT-Ih C-Der p 1-3T融合基因,并插入至原核表达载体p ET-28a(+)中,构建重组原核表达载体p ET-28a(+)-TATIh C-Der p 1-3T,Bam HⅠ和XhoⅠ进行双酶切和测序鉴定。重组载体转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳分析和Western blot验证,纯化TAT-Ih C-Der p 1-3T蛋白后进行Ig E结合试验。结果双酶切和测序结果表明,成功构建了p ET-28a-TAT-Ih C-Der p 1-3T重组原核表达载体;SDS-PAGE电泳分析显示TAT-Ih C-Der p 1-3T可诱导表达;Western blot检测表明该融合蛋白纯化成功;Ig E结合试验表明TAT-Ih C-Der p 1-3T结合屋尘螨过敏病人血清Ig E的能力强于Der p 1变应原(P0.001)。结论成功构建了可表达经MHC通路的编码Der p 1的3段T细胞表位的重组p ET-28a-TAT-Ih C-Der p 1-3T载体,纯化的TAT-Ih C-Der p 1-3T具有较强的Ig E结合能力,从而为后续经MHC通路的特异性免疫治疗奠定基础。
【作者单位】： 皖南医学院医学寄生虫学教研室;皖南医学院生理学教研室;皖南医学院弋矶山医院呼吸内科;
【关键词】： 屋尘螨 融合肽疫苗 类变应原 原核表达 T细胞表位 IgE结合试验
【基金】：国家自然科学基金(81270091,30872367,81172790)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 过敏性哮喘是以可逆性气道阻塞、支气管炎症以及黏液分泌过多等主要临床特征的Ⅰ型变态反应疾病[1-2]。屋尘螨是诱发过敏性哮喘的重要变应原,约80%的过敏性哮喘患者对屋尘螨1类变应原Der p 1结合呈阳性[3-6]。特异性免疫治疗(specific immunotherapy,SIT)是惟一可长时间持续缓

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本文编号：590266