小鼠巨细胞病毒重复感染促进疾病进展

发布时间：2017-07-30 10:06

  本文关键词：小鼠巨细胞病毒重复感染促进疾病进展

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【摘要】：目的在整体水平观察小鼠巨细胞病毒（murinecytomegalovirus,MCMV）重复感染（reinfection）对MCMV全身播散性感染小鼠模型各器官病理损害程度及病毒滴度的影响，初步探讨其促进疾病进展的免疫学机制。 方法 1、MCMV重复感染动物模型的建立及标本收集：将96只4周龄8-10g幼年雌性BALB/c小鼠随机分成4组，分别为正常对照组（简称M组，DMEM/H+DMEM/H）、单次感染组（简称S组，DMEM/H+MCMVSmith）、两次感染同株病毒组（简称SS组，MCMVSmith+MCMVSmith）、两次感染不同株病毒组（简称SR组，MCMVSmith+MCMVRM461）。具体操作方法，给小鼠腹腔注射DMEM/H或者MCMVSmith病毒悬液，于第1次注射后第5天再次腹腔注射DMEM/H、MCMVSmith或者MCMVRM461病毒悬液，分别在第2次注射后的3d、7d、14d、28d无菌取唾液腺、肺脏、心脏、肝脏、肾脏、脾脏组织标本进行检测。 2、各脏器病理损害程度评估：取各组织脏器进行石蜡切片和常规HE染色，不同脏器采用相应的半定量标准进行病理损害程度评估。 3、各脏器感染性病毒滴度的检测：采用标准蚀斑法检测各组织脏器中的病毒滴度。 4、流式细胞术检测Th1和Th2比率：收集各组脾脏，无菌分离脾细胞。采用灭活MCMV和PMA/I体外刺激培养6h后，流式细胞术检测各组不同时间点脾细胞中Th1（CD4~+IFN-γ~+）和Th2（CD4~+IL-4~+）细胞的比率变化。 结果 1、感染后3d各组织脏器已出现明显炎症改变，除肾脏在感染后14d炎症反应最重外，余脏器组织在感染7d时最重，之后缓慢减轻，脾脏和唾液腺的病理损伤恢复最为迅速。总体而言，SS组和SR株组的炎症改变程度较S组更严重。各感染组小鼠脏器的病变特点主要为：肺组织肺泡间隔增宽，肺泡间质炎性细胞浸润，肺泡内可见出血，水肿，终末细支气管上皮细胞脱落，毛细血管充血，在终末细支气管上皮细胞核内可见包涵体；肝组织肝细胞气球样变性，嗜酸性变，点灶状坏死，门管区炎性细胞浸润，肝细胞核内可见病毒包涵体；肾组织为肾小球内细胞增多，肿胀，包曼氏囊变窄,肾间质少量炎性细胞浸润，可见肾小管上皮细胞坏死及上皮细胞核内包涵体；心肌组织为心肌细胞水肿，溶解坏死，心肌间质少量炎性细胞浸润，心肌细胞核内可见包涵体；脾脏次级淋巴细胞增生，吞噬细胞浸润，白髓病理性增生，严重时红髓和白髓结构破坏、组织坏死；唾液腺中出现炎性浸润灶，严重时出现结构的破坏。 2、感染后3d，MCMV主要播散脏器中检出感染性病毒，，同期各组织脏器中病毒滴度以唾液腺最高，其次为肺脏组织，感染后7d，唾液腺和肺组织中病毒滴度达到峰值，随后逐渐下降，于28d检测不到。各时间点SS组和SR株组平均病毒滴度均高于S组，急性感染早期（3d）SR株组与SS组唾液腺滴度相比，差异有统计学意义（P0.05），而余时间点SR株组与SS组之间无明显差异。各感染组肾脏在7d时检出病毒，S组的病毒迅速被清除，14d检测不出，而二次感染组感染后14d病毒滴度达到高峰，28d时测不到。肝脏组织在感染后3d检出较低的病毒滴度，各感染组之间没有明显的差异。脾脏组织只在感染后3d的二次感染组偶有检出，余时间点均未检出。心脏各时间点均未检出感染性病毒。 3、脾脏淋巴细胞中Th1（CD4~+IFN-γ~+）和Th2（CD4~+IL-4~+）细胞比率变化：在MCMV感染后3d、7d后，各感染组Th1（CD4~+IFN-γ~+）水平明显高于对照组，且SS组和SR株组均高于S组水平（P0.05）；在14d和28d时，其水平迅速下降，与对照组比无明显差异；在感染后3d、7d、14d，Th2（CD4~+IL-4~+）的水平均较低，在28d时，SR株组Th2（CD4~+IL-4~+）细胞比率明显升高，高于正常对照和其他感染组。 结论 1、通过给BALB/c序贯注射Smith和RM461毒株可以成功建立小鼠的重复感染模型。 2、MCMV的重复感染能增加急性期宿主组织脏器中感染性病毒含量，并加重脏器病理损伤程度。在急性感染早期，不同MCMV毒株的重复感染较同一毒株的重复感染可导致更高的组织病毒载量。 3、MCMV的重复感染对宿主的不利影响可能跟早期Th1(CD4~+IFN-γ~+)的水平明显增高导致炎性损伤和后期Th2(CD4~+IL-4~+)水平增高导致免疫抑制密切相关。
【关键词】：巨细胞病毒 重复感染 组织病理 干扰素γ 白细胞介素4
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-16
• 材料和方法16-23
• 实验结果23-36
• 讨论36-40
• 结论40-41
• 参考文献41-48
• 综述48-66
• 参考文献57-66
• 致谢66

【参考文献】

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本文编号：593649