心肌细胞的培养鉴定及β3-AR蛋白提取方法的比较

发布时间：2017-07-31 09:17

  本文关键词：心肌细胞的培养鉴定及β3-AR蛋白提取方法的比较

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【摘要】：目的优化培养乳鼠心肌细胞的技术,筛选出简便、准确、特异的提取心肌细胞β3-肾上腺素能受体(β3-AR)膜蛋白的方法。方法使用Ⅱ型胶原酶和差速贴壁法收集心肌细胞,分别用总蛋白法、超速离心法、试剂盒法提取心肌细胞β3-AR膜蛋白;BCA法进行蛋白定量;Western blot法检测蛋白样品中β3-AR和GAPDH相对含量及提取蛋白的特异性。结果优化心肌细胞的培养方法可以使所得细胞产量大、浓度高,满足后续实验。试剂盒法提取蛋白的浓度(8.26±0.29)g/L总蛋白法提取法的(5.12±0.47)g/L超速离心法的(3.20±0.37)g/L,差异均有统计学意义。Western blot检测结果示,试剂盒提取法所得β3-AR膜蛋白含量(0.22±0.05)超速离心法(0.09±0.03)总蛋白提取法(0.01±0.01),差异均有统计学意义。结论优化培养心肌细胞的方法可获得高产量、高纯度的细胞。试剂盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的浓度和特异性。
【作者单位】： 新疆石河子大学医学院第一附属医院心内科;新疆医科大学第一附属医院心脏中心;
【关键词】： 受体 肾上腺素能β 肌细胞 心脏 提取法 细胞培养技术 心肌细胞 β-AR膜蛋白
【基金】：国家自然科学基金-地区科学基金项目(81260028) 石河子大学科学技术研究发展计划“自然科学与技术创新”团队创新项目(2011ZRKXTD-07)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 心肌细胞的原代培养具有保持细胞特有结构和功能的特点,目前已被广泛应用于心血管等疾病的基础研究领域[1]。由于心肌细胞是终末细胞,不具备分化及增殖能力,如何成功培养高纯度、活力好的心肌细胞就成为许多研究的前提。近年来的研究表明β3-肾上腺素能受体(β3-adrenergic re

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本文编号：598430