优良双歧杆菌的筛选及其生理功能研究

发布时间：2017-07-31 11:02

  本文关键词：优良双歧杆菌的筛选及其生理功能研究

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【摘要】：双歧杆菌作为人和动物肠道益生菌群的重要组成部分，具有促进体内营养物质的消化吸收、生物拮抗作用、提高免疫力和抗癌等生理功能。本课题从健康新生儿、婴儿及成人粪便中有目的性、针对性地筛选到一株耐酸、耐胆盐的双歧杆菌，并对其益生功能进行了研究。主要研究成果如下： (1)双歧杆菌的筛选和鉴定。利用添加X-Gal的改良MRS作为选择性培养基初筛得到75株疑似双歧杆菌的菌株，经耐酸耐胆盐复筛、生理生化鉴定及分子生物学鉴定后，确定一株优良菌株NCU712为长双歧杆菌。 (2) NCU712的生长曲线。NCU712代谢葡萄糖产生乳酸、乙酸等有机酸，0-4h为延滞期，4-16h为对数生长期，16-24h为稳定期，24h之后，菌体进入衰亡期。 (3) NCU712的胃肠道耐受性研究。在胃液pH2.5和3.0时，NCU712的D值分别为30.42、92.97min；菌体在胃液pH3.5和4.0的环境中，活菌数在培养过程中略有上升。人工肠液作用4.0h后，活菌数仍有108CFU/mL，且在0.30%胆盐环境中培养24h后，活菌数仅下降一个数量级。 (4) NCU712的黏附性能研究。稳定期黏附性能最好，当菌体浓度108CFU/mL时，NCU712的黏附指数随菌体浓度升高而增大，随后黏附指数变化不显著；共培养时间对菌体黏附性能影响在作用2.0h之后达到饱和；NCU712在中性环境的黏附性能最好。 (5) NCU712的抗氧化性能研究。增大样品加入量，，活菌体、菌体破碎物、CFS的DPPH、羟自由基清除率、总还原力、抗脂质过氧化率等抗氧化性能指标均升高，且CFS的DPPH清除率远高于阳性对照Vit C的清除率，最高可达100%，羟自由基清除率活菌体最高，CFS次之。 (6) NCU712的抑菌性能研究。NCU712对7株常见致病菌有较好的抑菌效果，且发酵液抑菌性普遍比无菌上清液好。抑菌圈直径大小随发酵时间延长而增大，当发酵时间大于28h时，抑菌圈直径变化不显著。NCU712的代谢产物可延长沙门氏菌的延滞期，缩短对数期，当添加量大于12%时，沙门氏菌的生长被完全抑制，说明NCU712对沙门氏菌的生长有较好的抑制作用。
【关键词】：双歧杆菌 选育 胃肠道耐受性 黏附性能 抗氧化性能 抑菌性能
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R371
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-11
• 第1章 引言11-19
• 1.1 双歧杆菌生物学特性11-12
• 1.1.1 形态特征11
• 1.1.2 代谢途径11
• 1.1.3 生物学分类及存在11-12
• 1.2 双歧杆菌生理作用12-16
• 1.2.1 营养作用12
• 1.2.2 抑菌性能12-14
• 1.2.3 通便功能14-15
• 1.2.4 抗衰老功能15
• 1.2.5 防止心血管疾病15-16
• 1.2.6 提高免疫力和抗癌16
• 1.3 双歧杆菌分离筛选的研究进展16-17
• 1.3.1 胃肠道耐受性良好的菌株筛选16
• 1.3.2 耐氧能力良好的菌株筛选16-17
• 1.3.3 高黏附能力的菌株筛选17
• 1.4 研究内容及意义17-19
• 1.4.1 研究内容17
• 1.4.2 技术路线17-18
• 1.4.3 研究意义18-19
• 第2章 双歧杆菌筛选分离及鉴定19-26
• 2.1 试验材料19-20
• 2.1.1 供分离样品19
• 2.1.2 培养基及缓冲液19
• 2.1.3 药品与试剂19-20
• 2.1.4 主要仪器与设备20
• 2.2 试验方法20-21
• 2.2.1 初筛20
• 2.2.2 耐酸、耐胆盐复筛20-21
• 2.2.3 形态学及生理生化鉴定21
• 2.2.4 分子生物学鉴定21
• 2.3 结果分析21-25
• 2.3.1 双歧杆菌初筛21-22
• 2.3.2 耐酸耐胆盐复筛22
• 2.3.3 形态及生理生化鉴定22-24
• 2.3.4 分子生物学鉴定24-25
• 2.4 本章小结25-26
• 第3章 生长曲线的绘制26-31
• 3.1 实验材料26-27
• 3.1.1 培养基及缓冲液26
• 3.1.2 药品与试剂26
• 3.1.3 主要仪器与设备26-27
• 3.2 试验方法27-28
• 3.2.1 吸光度的测定27
• 3.2.2 酸度的测定27-28
• 3.2.3 葡萄糖和有机酸的测定28
• 3.3 结果分析28-30
• 3.3.1 活菌数及吸光度值的变化28-29
• 3.3.2 酸度及 pH 值的变化29
• 3.3.3 葡萄糖及有机酸的变化29-30
• 3.4 本章小结30-31
• 第4章 胃肠道耐受性研究31-35
• 4.1 实验材料31-32
• 4.1.1 培养基及缓冲液31
• 4.1.2 药品与试剂31
• 4.1.3 主要仪器与设备31-32
• 4.2 试验方法32
• 4.2.1 人工胃液耐受性试验32
• 4.2.2 人工肠液耐受性试验32
• 4.2.3 耐胆盐试验32
• 4.3 结果分析32-34
• 4.3.1 人工胃液耐受性32-33
• 4.3.2 人工肠液耐受性33-34
• 4.3.3 耐胆盐实验34
• 4.4 本章小结34-35
• 第5章 黏附性能研究35-41
• 5.1 实验材料35-36
• 5.1.1 细胞来源35
• 5.1.2 培养基及缓冲液35
• 5.1.3 药品与试剂35-36
• 5.1.4 主要仪器与设备36
• 5.2 试验方法36-37
• 5.2.1 黏附实验36
• 5.2.2 生长阶段对黏附作用的影响36-37
• 5.2.3 菌体浓度对黏附作用的影响37
• 5.2.4 作用时间对黏附作用的影响37
• 5.2.5 环境 pH 值对黏附作用的影响37
• 5.3 结果分析37-40
• 5.3.1 生长阶段对黏附作用的影响37-38
• 5.3.2 菌体浓度对黏附作用的影响38
• 5.3.3 共培养时间对黏附作用的影响38-39
• 5.3.4 环境 pH 值对黏附作用的影响39-40
• 5.4 本章小结40-41
• 第6章 抗氧化性能研究41-48
• 6.1 实验材料41-42
• 6.1.1 培养基及缓冲液41
• 6.1.2 药品与试剂41-42
• 6.1.3 主要仪器与设备42
• 6.2 试验方法42-44
• 6.2.1 样品处理42
• 6.2.2 DPPH 自由基清除率的测定42
• 6.2.3 羟自由基清除率的测定42-43
• 6.2.4 总还原力的测定43
• 6.2.5 抗脂质过氧化能力的测定43-44
• 6.3 结果分析44-47
• 6.3.1 DPPH 自由基清除率的测定44-45
• 6.3.2 羟自由基清除率的测定45
• 6.3.3 总还原力的测定45-46
• 6.3.4 抗脂质过氧化能力的测定46-47
• 6.4 本章小结47-48
• 第7章 抑菌性能研究48-54
• 7.1 实验材料48-49
• 7.1.1 菌体来源48
• 7.1.2 培养基及缓冲液48
• 7.1.3 药品与试剂48
• 7.1.4 主要仪器与设备48-49
• 7.2 试验方法49-50
• 7.2.1 发酵液及上清液的抑菌性49
• 7.2.2 不同生长阶段的发酵液及上清液的抑菌性49
• 7.2.3 NCU712 对沙门氏菌生长的影响49-50
• 7.3 结果与分析50-53
• 7.3.1 发酵液及上清液的抑菌性50-51
• 7.3.2 不同生长阶段的抑菌性51-52
• 7.3.3 NCU712 对沙门氏菌生长的影响52-53
• 7.4 本章小结53-54
• 第8章 结论与展望54-56
• 8.1 结论54-55
• 8.2 展望55-56
• 致谢56-57
• 参考文献57-65
• 攻读学位期间的研究成果65

【参考文献】

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本文编号：598798