Sirt1对间充质干细胞成脂分化能力的调控

发布时间：2017-07-31 14:07

  本文关键词：Sirt1对间充质干细胞成脂分化能力的调控

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【摘要】：间充质干细胞(MSC)是干细胞家族的成员之一,作为一种成体干细胞,MSC能分化为肌肉、脂肪、骨骼等成体细胞。近年来越来越的研究重点放在了MSC的自我跟新能力以及分化潜能的调控机制上。Nanog、sox2以及oct4被证实在MSC的干性维持中具有不可替代的作用。MSC在诸多研究中还被证实可以用于诸多疾病的治疗,如神经性疾病、肺损伤、脊髓损伤以及在再生医学领域。 沉默信号调节因子(sirt1)是近年发现的sirtuin家族成员之一,它在NAD+辅助下进行对靶基因的脱乙酰化作用,从而参与到机体诸多代谢通路当中。在sirt1对于干细胞的调控研究单中,诸多研究显示sirt1是有利于干细胞的增殖和分化潜能保持的。在造血干细胞中sirt1也是起着维持功能以及避免DNA损伤等重要功能。但是关于sirt1在MSC中调控MSC的成脂分化的相关研究很少,相关机制并不清楚。 本文通过使用sirt1酶活的特异性抑制剂ex527,利用real-time pcr、β半乳糖苷酶染色以及油红O染色等方法,研究了sirt1在MSC成脂分化中的作用。获得如下结果： 1、Sirt1酶活抑制剂(ex527)可影响分化启动后的MSC细胞的成脂分化效率；而Sirt1激动剂白藜芦醇则不影响其分化效率； 2、抑制nampt酶活能显著抑制C3H10t成脂分化的效率； 3、Sirt1抑制剂(NAM)处理分化中的C3H10t会加速细胞衰老； 4、Sirt1酶活抑制剂(ex527)除了引起C3H10t细胞成脂分化效率降低外,也导致炎症信号通路相关基因(IL-6、cox2)的上调及自噬通路（atg5、atg7、beclin1)和蛋白酶体信号通路(foxo4、psmd11)相关基因的下调。
【关键词】：MSC sirt1 成脂分化 细胞自噬 细胞衰老
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：Q25;R329
【目录】：

• 摘要7-8
• ABSTRACT8-9
• 缩略语表9-10
• 1 前言10-28
• 1.1 间充质干细胞10-20
• 1.1.1 nanog、sox2、oct4对于干细胞的重要性10-13
• 1.1.2 MSC的成脂分化13-16
• 1.1.3 影响MSC分化的信号通路以及相关因子16-19
• 1.1.4 MSC的医学应用前景19-20
• 1.2 沉默信号因子(sirt1)20-26
• 1.2.1 sirt1的相关功能21-23
• 1.2.2 sirt1与干细胞23-24
• 1.2.3 sirt1与成脂分化24-25
• 1.2.4 sirt1的抑制剂与激动剂25-26
• 1.3 研究目的与意义26-28
• 2 材料与方法28-33
• 2.1 实验材料28
• 2.2 主要仪器、试剂和工作液28-30
• 2.2.1 主要仪器28
• 2.2.2 主要试剂28-29
• 2.2.3 主要工作液29
• 2.2.4 常用生物学软件29-30
• 2.3 实验方法30-33
• 2.3.1 细胞分离、培养及分化30
• 2.3.2 细胞转染30
• 2.3.3 RNA提取及反转录30-31
• 2.3.4 实时荧光定量PCR31-32
• 2.3.5 骨髓间充质干细胞的分离32
• 2.3.6 数据处理及误差分析32-33
• 3 结果与分析33-40
• 3.1 SIRT1在原代MSC中下调nanog及sox233-34
• 3.2 sirt1对C3H10t细胞系干性基因的调控34
• 3.3 抑制sirt1酶活对C3H10t细胞系成脂分化能力的影响34-36
• 3.4 白藜芦醇以及Nampt抑制剂(Fk866)对于C3H10t成脂分化能力的影响36-37
• 3.5 NAM处理成脂分化中的C3H10t将会加速细胞衰老37-38
• 3.6 Sirt1抑制剂(ex527)处理启动分化后的C3H10t细胞引起其它通路基因改变38-40
• 4 讨论40-44
• 5 结论与创新点44-45
• 5.1 结论44
• 5.2 创新点44-45
• 参考文献45-55
• 致谢55

【共引文献】

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本文编号：599516