L型变异对结核分枝杆菌耐药性的影响及茜草素抗菌作用的研究

发布时间：2017-08-01 14:23

  本文关键词：L型变异对结核分枝杆菌耐药性的影响及茜草素抗菌作用的研究

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【摘要】：目的建立结核分枝杆菌L型的诱导模型,观察L型变异对结核分枝杆菌耐药性的影响。综合评估中药茜草素对结核分枝杆菌L型的作用,为开发新型抗结核中药提供实验基础。 方法①通过3种不同浓度的药物与3种结核分枝杆菌L型培养基进行组合,将结核分枝杆菌细菌型诱导为L型菌株；②分离临床标本中的结核分枝杆菌L型菌株；③通过抗酸染色、荧光染色、电镜检查、结核抗原检测及基因检测方法鉴别诱导和临床分离的结核分枝杆菌L型菌株；④配制含一线抗结核药物的药敏培养基和茜草素药敏培养基；⑤将结核分枝杆菌L型接种于含一线抗结核药物培养基及培养；⑥对诱导和临床分离的结核分枝杆菌L型菌株进行DNA提取及相关耐药基因测序,并分析其与结核分枝杆菌L型表型变异的联系；⑦将结核分枝杆菌L型接种于茜草素药敏培养基及培养,观察中药茜草素对结核分枝杆菌L型的作用。 结果①成功建立结核分枝杆菌L型的诱导模型,以含2.5μg/ml的异烟肼在92-3TB-L液体培养基中诱导结核分枝杆菌L型的效果最佳；②结核分枝杆菌L型的表型变异可以造成结核分枝杆菌的耐药性,诱导的结核分枝杆菌L型在基因序列未改变的情况下对异烟肼、利福平、乙胺丁醇和链霉素耐药；③茜草素在药物浓度为640μg/ml,对结核分枝杆菌L型有明显的抑菌作用。 结论结核分枝杆菌L型的表型变异与其耐药性有一定的联系,中药茜草素在体外对结核分枝杆菌有明显的抑菌作用。
【关键词】：结核分枝杆菌 L型 表型变异 茜草素
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.911
【目录】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 第一部分 L型变异对结核分枝杆菌耐药性的影响10-29
• 一、材料与方法10-20
• (一) 实验菌株10
• (二) 实验器材10-11
• (三) 试剂与培养基11-14
• 1. 实验试剂11-12
• 2. 结核分枝杆菌L型92-3 TB-L液体培养基12
• 3. 结核分枝杆菌细菌型92-3 TB液体培养基12-13
• 4. 结核分枝杆菌L型TAS-L培养基13
• 5. 结核分枝杆菌L型Dubos肉汤培养基13
• 6. 结核分枝杆菌L型诱导液的配制13-14
• 7. 92.3 TB-L固体西药药敏培养基14
• 8. 50 ×TAE Buffer14
• (四) 实验方法14-20
• 1. 标准菌株的接种与诱导14-15
• 2. 临床标本处理15
• 3. 结核菌L型的鉴定15-16
• 4. 结核菌的耐药性检测16-18
• 5. 结核菌耐药基因测序18-20
• 二、结果20-25
• (一) 诱导后的结核菌L型菌株20-21
• (二) 临床分离的结核菌L型菌株21-22
• (三) 结核菌L型对抗结核西药的耐药性22
• (四) 基因测序结果22-25
• 1. DNA提取22-23
• 2. 测序结果23-25
• 三、分析与讨论25-28
• (一) 结核菌L型的形成机制25-26
• (二) 结核菌L型的生理特性及致病性26-27
• (三) 结核菌L型变异对其耐药性的影响27-28
• 四、小节28-29
• 第二部分 中药茜草素对结核菌L型作用的实验研究29-38
• 一、材料与方法29-32
• (一) 实验菌株29
• (二) 实验器材29-30
• (三) 试剂与培养基30-32
• 1. 实验试剂30-31
• 2. 冻存液配制31
• 3. 含茜草素的92-3 TB-L固体药敏培养基的制备31-32
• (四) 实验方法32
• 1. 菌悬液制备32
• 2. 茜草素含药培养基的配制及结核菌L型菌株的接种32
• 二、结果32-33
• 三、分析与讨论33-37
• (一) 茜草的化学成分及生物活性33-36
• 1. 主要化学成分33-35
• 2. 茜草的生物活性35-36
• (二) 茜草及其水提液在体外抗菌活性36
• (三) 茜草素对结核菌L型的作用36-37
• 四、小节37-38
• 结论38-39
• 参考文献39-44
• 附表44-45
• 致谢45-46
• 文献综述46-52
• 参考文献51-52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：604693