神经干细胞移植治疗大鼠无神经节细胞症的初步研究

发布时间：2017-08-02 16:23

  本文关键词：神经干细胞移植治疗大鼠无神经节细胞症的初步研究

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【摘要】：目的：探索建立适于神经干细胞移植的巨结肠动物模型的方法,并观察研究该模型的的病理组织学特征。观察神经干细胞(Neural stem cells, NSCs)在肠无神经节细胞症的大鼠直肠壁内移植的存活和分化情况以及肠运动和反射功能的改善情况,探讨神经干细胞移植对肠无神经节细胞症的治疗作用 方法：清洁级8周龄SD (Sprague Dawley远交群)大鼠60只。雌雄不拘,体重(200±15)g,由天津医科大学实验动物中心提供,室温单笼饲养。随机分为2组：模型组(n=30)(采用BAC(苯扎氯胺)湿敷大鼠结肠肠壁；对照组(n=30)采用生理盐水湿敷大鼠结肠肠壁)。术后通过大体解剖观察各组对象结肠变化,HE染色观察处理段结肠壁组织学改变。用0.5%苯扎氯铵溶液浸湿的脱脂棉紧贴肠壁包绕标记段结肠一周45分钟,湿敷范围3cm。术后4周通过组织病理学观察处理段结肠神经细胞消失。将已成功建立肠无神经节细胞症模型的SD大鼠60只,随机分为2组。模型组用免疫荧光标记的提纯好的脐带间允质神经干细胞150微升(浓度107/ml)分3处注入大鼠结肠肠壁,对照组用生理盐水。并分别于注射后1-8周行大体观察,免疫荧光显微镜观察,钡灌肠观察,处理段结肠行HE染色、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S-100蛋白免疫组织化学染色观察。 结果：苯扎氯胺作用后,大体解剖见对照组无异常,BAC组处理段结肠狭窄梗阻,近段结肠大量粪便堆积,呈不同程度的扩张。组织学检查见对照组结肠壁肠肌层排列有序,粘膜层及粘膜下层肠神经竹存在。BAC组粘膜及粘膜下层无明显病理性改变,平滑肌层增厚,肌间神经元数目明显减少。NSCs移植后可检测到肠壁内移植细胞存活,部分分化为神经节细胞和星形胶质细胞。HE检测和免疫组化检测结果显示,模型组手术段肠壁内神经细胞表达明显高于对照组(注射范围内均可见神经细胞)。钡灌肠结果显示,神经干细胞移植术前后结肠形态功能有明显不同。 结论：运用浓度0.5%苯扎氯按成功选择性去除了大鼠结肠神经节细胞,构建成与无神经节细胞症具有相似病理特征的大鼠巨结肠模型,为下一步的神经干细胞移植治疗先天性巨结肠症奠定实验基础。脐带间充质干细胞来源的NSCs在无神经节细胞的肠壁内可以存活和分化,并能在一定程度上恢复肠神经功能,从而为NSCs移植治疗肠无神经节细胞症提供了实验依据。
【关键词】：无神经节细胞症 动物模型 神经干细胞 移植 功能改善
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R726.1;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 缩略语/符号说明8-9
• 前言9-13
• 研究现状、成果9-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、大鼠肠无神经节细胞症动物模型的建立13-22
• 1.1 对象和方法13-17
• 1.1.1 实验材料13
• 1.1.2 实验试剂及器械13-14
• 1.1.3 溶液配制14-17
• 1.2 结果17-20
• 1.2.1 症状及大体形态学观察17-18
• 1.2.2 组织学检查18-20
• 1.3 讨论20-21
• 1.4 小结21-22
• 二、神经干细胞的分离培养及移植22-36
• 2.1 对象和方法23-26
• 2.1.1 实验动物23
• 2.1.2 主要仪器设备和试剂23
• 2.1.3 实验方法23-26
• 2.2 结果26-32
• 2.3 讨论32-35
• 2.4 小结35-36
• 结论36-37
• 参考文献37-41
• 发表论文及参加科研情况41-42
• 综述一42-48
• 参考文献45-48
• 综述二48-54
• 参考文献51-54
• 致谢54

【引证文献】

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1 徐纪荣;骨髓间充质干细胞移植治疗实验性巨结肠的实验研究[D];重庆医科大学;2004年

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本文编号：610170