HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒的制备及纯化

发布时间：2017-08-02 17:08

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【摘要】：目的制备丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并进行纯化和鉴定。方法采用脂质体法分别将4个HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合重组表达载体p CI-HBSE1、p CI-HBSE2、p CI-HBSE3、p CI-HBSE4转染HEK293T细胞,48 h后收集培养上清,获得自我装配的嵌合HCV中和表位的HBV VLPs,分别命名为VLPs-SE1、VLPs-SE2、VLPs-SE3、VLPs-SE4,蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后,电镜观察VLPs,电化学发光法进行HBs Ag定量,ELISA法检测嵌合VLPs作为包被抗原与HCV感染患者血清的反应。结果电镜观察可见4种嵌合VLPs,大小约为22 nm;浓度最高的VLPs-SE2 HBs Ag含量达5.51×103ng/ml,该浓度可满足后续试验的要求;用混合VLPs作为包被抗原检测的HCV感染患者血清中和抗体水平稍高于单一VLPs作为包被抗原检测的水平。结论成功制备了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合VLPs,为进一步评价VLPs体内诱导的中和抗体及中和抗体的保护作用奠定了基础。
【作者单位】： 第四军医大学唐都医院临床实验与检验输血科;第四军医大学基础部微生物学教研室;
【关键词】： 丙型肝炎病毒 中和抗原表位 乙型肝炎病毒 S抗原 嵌合 病毒样颗粒
【基金】：国家自然科学基金项目(81072500)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染已成为严重的公共卫生问题。目前全球感染者约1.7亿,每年新增300万~400万例,一些高发地区感染率甚至达10%~30%[1]。HCV感染有免疫力宿主后,仍有高达70%的存活可能性,可导致肝炎慢性化,并可发展为肝纤维化和肝硬化,最终导致肝衰竭或肝

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