耐药性嗜麦芽窄食单胞菌和绿脓杆菌噬菌体初步应用研究

发布时间：2017-08-03 06:26

  本文关键词：耐药性嗜麦芽窄食单胞菌和绿脓杆菌噬菌体初步应用研究

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【摘要】：目的：嗜麦芽窄食单胞菌是一种常见的条件致病菌,由于其能定殖在呼吸道上皮细胞和医疗设备表面使其很容易感染免疫力低下患者,嗜麦芽窄食单胞菌所导致的感染以呼吸道感染最为常见。铜绿假单胞杆菌也是临床上最常见的条件致病菌之一,两类细菌对多类抗生素具有固有耐药性,它们的院内感染对人类健康特别是免疫力低下患者造成重大威胁。 本研究就目前嗜麦芽窄食单胞菌和铜绿假单胞杆菌的严重耐药性现状,分别利用临床分离的多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌SMA2和铜绿假单胞杆菌Pa44,从医院污水中分离到可裂解SMA2的噬菌体IME13、IME15以及Pa44的噬菌体Pa27P1,分析它们的生物学特性,并构建SMA2免疫抑制Balb/c小鼠肺部感染治疗模型、Pa44腹腔感染小鼠模型及其治疗模型。 方法：以临床分离的耐药性嗜麦芽窄食单胞菌SMA2和铜绿假单胞杆菌Pa44为指示菌,利用噬斑法从医院污水中分离噬菌体；利用双层平板培养法测定噬菌体效价、最佳感染复数及一步生长曲线等生物学特性；蛋白酶K/SDS法提取噬菌体IME13、IME15基因组并用454测序仪测定噬菌体全基因组序列。 用滴鼻法给小鼠肺部感染最小致死量的嗜麦芽窄食单胞菌SMA2,感染后分别用嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体IME13、IME15经滴鼻方式进行治疗,记录小鼠死亡率和噬菌体的治疗效果。利用腹腔注射的方法建立小鼠的铜绿假单胞杆菌Pa44全身感染模型。应用筛选出的噬菌体Pa27P1分不同时间点和不同治疗剂量经腹腔注射对腹腔感染耐药性铜绿假单胞菌Pa44的Balb/c小鼠进行治疗,观察噬菌体的治疗效果。 结果：成功分离出2株嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体IME13、IME15,其中IME13具有独特的噬斑形态和多达3100的爆发量,IME15是第一株T7类嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体；成功分离出铜绿假单胞杆菌噬菌体近90株,并筛选出5株相对广谱的Pa3P1、Pa4P5、Pa12P1、Pa20P5和Pa28P2,这五株噬菌体的组合在体外能裂解所有18株铜绿假单胞杆菌。 动物实验表明噬菌体IME13和IME15对于嗜麦芽窄食单胞菌SMA2导致的肺部感染具有较好的治疗效果,噬菌体Pa27P1对于铜绿假单胞杆菌Pa44导致的全身感染和肺部感染具有较好的治疗效果,在感染后及时进行噬菌体治疗对于降低小鼠死亡率有一定意义。结论：随着嗜麦芽窄食单胞菌和铜绿假单胞杆菌耐药性和对免疫抑制患者的致病性日趋严重,积极探索不依赖抗生素的治疗方法势在必行。研究结果表明利用医院废水分离噬菌体并用于治疗细菌感染性疾病的方法是可行的,有望为细菌感染的抗生素替代疗法奠定基础。图11幅,表4个,参考文献43篇。
【关键词】：嗜麦芽窄食单胞菌 铜绿假单胞杆菌 细菌耐药性 噬菌体 生物学特性 全基因组测序 噬菌体治疗
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-11
• 符号说明11-12
• 1 绪论12-18
• 1.1 噬菌体及噬菌体治疗12-14
• 1.1.1 噬菌体简介12-14
• 1.1.2 活噬菌体用于细菌性疾病的治疗14
• 1.2 嗜麦芽窄食单胞菌及其耐药现状14-15
• 1.2.1 嗜麦芽窄食单胞菌概述14-15
• 1.2.2 嗜麦芽窄食单胞菌致病性及耐药性现状15
• 1.3 铜绿假单胞杆菌及其耐药现状15-17
• 1.3.1 铜绿假单胞杆菌概述15-16
• 1.3.2 铜绿假单胞杆菌致病性和耐药性16-17
• 1.4 本文研究内容17-18
• 2 嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体的分离、鉴定与生物学特性研究18-30
• 2.1 材料与方法18-23
• 2.1.1 供试菌株18
• 2.1.2 培养基及试剂18
• 2.1.3 嗜麦芽窄食单胞菌SMA2的16S rRNA种属鉴定18-19
• 2.1.4 PCR产物纯化19
• 2.1.5 嗜麦芽窄食单胞菌SMA2耐药谱鉴定19
• 2.1.6 嗜麦芽窄食单胞菌SMA2噬菌体的分离19-20
• 2.1.7 嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体IME13、IME15的生物学特性研究20-23
• 2.1.8 噬菌体IME13、IME15的全基因组测序23
• 2.2 结果23-28
• 2.2.1 嗜麦芽窄食单胞菌SMA2的种属鉴定结果23-24
• 2.2.2 嗜麦芽窄食单胞菌SMA2的耐药谱鉴定结果24
• 2.2.3 嗜麦芽窄食单胞菌SMA2的噬菌体分离结果24-25
• 2.2.4 噬菌体IME13、IME15最佳感染复数的测定结果25
• 2.2.5 IME13和IME15一步生长曲线25-28
• 2.3 讨论28-30
• 3 嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体治疗肺部感染小鼠模型30-35
• 3.1 引言30
• 3.2 材料与方法30
• 3.2.1 菌株、噬菌体、培养基及试剂30
• 3.2.2 实验动物30
• 3.3 最小致死量的测定30-31
• 3.3.1 菌液制备30-31
• 3.3.2 免疫抑制动物感染实验31
• 3.3.3 感染模型指标评价31
• 3.4 噬菌体IME13、IMEl 5治疗SMA2肺部感染的初步探索31-32
• 3.4.1 菌液制备31
• 3.4.2 免疫抑制动物感染治疗实验31-32
• 3.4.3 治疗模型评价指标32
• 3.5 结果32-33
• 3.5.1 嗜麦芽窄食单胞菌SMA2肺部感染Balb/c小鼠模型的建立32
• 3.5.2 噬菌体治疗效果的初步研究32-33
• 3.6 讨论33-35
• 4 绿脓杆菌噬菌体的分离、鉴定与生物学特性研究35-46
• 4.1 材料与方法35-39
• 4.1.1 供试菌株和质粒35
• 4.1.2 培养基及试剂35
• 4.1.3 绿脓杆菌噬菌体的大规模分离35-36
• 4.1.4 铜绿假单胞杆菌Pa44的16S rRNA鉴定36
• 4.1.5 PCR产物纯化36-37
• 4.1.6 铜绿假单胞杆菌Pa44的耐药谱鉴定37
• 4.1.7 噬菌体Pa27P1的生物学特性研究37-39
• 4.2 结果39-44
• 4.2.1 噬菌体的分离及其宿主范围39-41
• 4.2.2 铜绿假单胞杆菌Pa44的16S rRNA鉴定41-42
• 4.2.3 铜绿假单胞杆菌Pa44的耐药谱鉴定42-43
• 4.2.4 噬菌体Pa27P1最佳感染复数的测定结果43
• 4.2.5 噬菌体Pa27P1一步生长曲线43-44
• 4.3 讨论44-46
• 5 铜绿假单胞杆菌噬菌体Pa27P1治疗全身感染小鼠模型46-51
• 5.1 材料与方法46
• 5.1.1 菌株、噬菌体、培养基及试剂46
• 5.1.2 实验动物46
• 5.2 最小致死量的测定46-47
• 5.2.1 菌液制备46
• 5.2.2 动物腹腔感染实验46-47
• 5.2.3 腹腔感染模型评价指标47
• 5.3 噬菌体Pa27P1治疗Pa44全身感染的初步探索47-48
• 5.3.1 菌液和噬菌体制备47
• 5.3.2 噬菌体Pa27P1治疗Pa44腹腔感染最佳治疗剂量的研究47
• 5.3.3 噬菌体Pa27P1治疗Pa44腹腔感染最佳治疗时间的研究47-48
• 5.3.4 治疗模型评价指标48
• 5.4 结果48-49
• 5.4.1 铜绿假单胞杆菌Pa44全身感染Balb/c小鼠模型的建立48
• 5.4.2 噬菌体Pa27P1治疗Pa44腹腔感染最佳治疗剂量的研究结果48-49
• 5.4.3 噬菌体Pa27P1治疗Pa44腹腔感染最佳治疗时间的研究结果49
• 5.5 讨论49-51
• 参考文献51-55
• 综述55-63
• 参考文献60-63
• 主要溶液的配制63-65
• 主要仪器65-66
• 攻读硕士学位期间发表的论文66-67
• 致谢67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 卓志娟;姚莉娟;;重症监护病房内嗜麦芽窄食单胞菌医院感染肺炎的临床及耐药性研究[J];国际检验医学杂志;2010年05期

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本文编号：613064