基于IgG4介导的蛋白质组学日本血吸虫诊断标志物的筛选及应用

发布时间：2017-08-07 08:38

  本文关键词：基于IgG4介导的蛋白质组学日本血吸虫诊断标志物的筛选及应用

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【摘要】：目的血吸虫病仍然是世界上危害最为严重的寄生虫疾病，由于我国政府的高度重视，我国血吸虫病疫情目前已达到基本控制阶段，传统的病原体直接检测技术已失去了金标准作用，低流行区血吸虫病的诊断遇到了严峻的挑战，提高监测敏感性为导向的低流行区监测技术是当前的重中之重，而血吸虫病的正确诊断是血吸虫病监控的第一步，也是最关键步骤。发展一种简便、经济、敏感和特异，尤其适合现场大规模检测的快速血吸虫病诊断方法，为我国血吸虫病的防控并最终消除提供重要的工具。 方法制作日本血吸虫感染动物模型，，收集日本血吸虫成虫；制备日本血吸虫成虫抗原（AWA），进行两维电泳（2-DE），再雇佣western-blot方法、用混合的血吸虫感染患者血清筛选，最后用抗人IgG4二抗检测血吸虫成虫抗原中能够与患者血清中IgG4抗体反应的抗原分子。切取这些与患者血清中IgG4结合的抗原分子用胰酶消化，进行质谱鉴定，并进行进一步的生物信息学分析，寻找具有诊断价值的候选分子，并克隆重组候选分子。最后将重组抗原包被反应板，用基于IgG4二抗作为检测工具的ELISA方法，来评估候选抗原在血吸虫病诊断中的应用价值。 结果建立了日本血吸虫成虫两维电泳图谱，western-blot结果显示，基于IgG4为检测工具的血清蛋白组学筛选出40多个具有免疫反应性的阳性蛋白点，其中有16个点能够与原始的2-DE凝胶相对应。质谱鉴定结果表明，这16个点分属于10个蛋白质，它们分别是日本血吸虫顺乌头酸酶（SjAA）、热休克蛋白70（SjHSP70）、M2型丙酮酸激酶（SjPKM2）、磷酸甘油酸酯激酶（SjPGK1）、α-L-岩藻糖苷酶（SjALF）、无机焦磷酸酶（SjIPP）、谷胱甘肽转移酶（SjGST）、日本血吸虫21.7kDa抗原（Sj21.7）、22.6kDa膜相关抗原（Sj22.6）和曼氏血吸虫肌浆钙结合蛋白（SmSCP）。通过生物信息学分析，SjIPP具有多种潜在的生物学功能，更重要的是，SjIPP含有丰富的B细胞抗原表位，可能预示，SjIPP在血吸虫病的疫苗开发和诊断应用中具有良好的前景。进一步，我们成功克隆并原核表达出了重组SjIPP（rSjIPP），而且纯化的rSjIPP纯度好，浓度也达到了3.5mg/ml。ELISA结果显示，rSjIPP对急性血吸虫感染诊断的敏感性极高，达到了100%，对慢性血吸虫感染诊断也较高，其敏感性为87.1%，其特异性为95%；可喜的是，与其它寄生虫的交叉反应较低，分别是肺吸虫为3.7%、肝吸虫为4.5%、线虫为4.2%。 结论利用IgG4为检测工具的血清蛋白质组学，成功从日本血吸虫成虫中筛选出了SjIPP诊断候选分子，并成功重组出rSjIPP。ELISA结果证明，rSjIPP在血吸虫病的诊断中具有良好的应用前景。
【关键词】：日本血吸虫 蛋白质组学 IgG4 无机焦磷酸酶（IPP） 诊断
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R383.24
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 1. 材料与方法12-34
• 1.1 实验材料12-18
• 1.2 实验方法18-34
• 2. 结果34-56
• 2.1 AWA 抗原浓度34-35
• 2.2 AWA 的血清蛋白质组学分析35-37
• 2.3 免疫反应性抗原的质谱鉴定37-45
• 2.4 SjIPP 生物信息学分析45-47
• 2.5 SjIPP 克隆、表达及鉴定47-51
• 2.6 rSjIPP 的诱导表达51-52
• 2.7 rSjIPP 的免疫学鉴定52-53
• 2.8 rSjIPP 纯化53-54
• 2.9 rSjIPP 在血吸虫病诊断中的评估54-56
• 3 讨论56-58
• 4 结论58-59
• 参考文献59-64
• 个人简历64-65
• 致谢65-66
• 综述66-78
• 参考文献73-78

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 吴福东,谢治民,袁斯姣,赵清海,郭家钢,董长安,潘炳荣,黄文长,周宪民;间接血凝试验诊断血吸虫病的研究[J];中国血吸虫病防治杂志;1991年03期

2 宋鸿焘,梁幼生,戴建荣,纪长生,神学慧,李龙根,殷芳;胶体染料试纸条法用于血吸虫病低度流行区化疗对象筛查的研究[J];中国血吸虫病防治杂志;2003年02期

3 何伟;朱荫昌;梁幼生;戴建荣;徐明;唐建霞;曹国群;华万全;李远林;杨忠;;粪检与免疫诊断方法检测日本血吸虫感染效果比较[J];中国血吸虫病防治杂志;2007年02期

4 郑浩;张利娟;朱蓉;许静;李石柱;郭家钢;肖宁;周晓农;;2011年全国血吸虫病疫情通报[J];中国血吸虫病防治杂志;2012年06期

本文编号：633780