吐温80促进邻苯二甲酸酯肠道吸收效应及机制研究

发布时间：2017-08-10 08:35

  本文关键词：吐温80促进邻苯二甲酸酯肠道吸收效应及机制研究

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【摘要】：背景 邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯[(di-(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP)作为增塑剂被广泛用于高分子材料中,比如聚氯乙烯(Polyvinyl chloride polymer, PVC),可以增加材料的柔韧性。DEHP是公认的一种环境内分泌干扰物,具有生殖毒性和雌激素效应,具有致癌、致畸、致突变的“三致”效应。 吐温80(Polysorbate80,聚山梨醇酯80)是一种非离子型表面活性剂,可用作乳化剂和润滑剂等广泛应用于食品中,并且在药剂学研究中可以通过抑制P-gp增加药物的生物利用度。 目的 本课题的目的是验证吐温80增加大鼠中DEHP的生物利用度的假说,并阐明其中可能机制。 方法 1.建立大鼠血浆中DEHP和其主要代谢产物MEHP简单、快速及高效的液相色谱(HPLC)检测方法。 2.检测在大鼠体内吐温80对DEHP的生物利用度的影响。 3.选用Caco-2细胞模型模拟肠道环境进行吐温80促进吸收的机理研究。以JC-1荧光探针研究吐温80对Caco-2细胞线粒体膜电位的影响；运用XF98线粒体功能检测系统研究吐温80对细胞线粒体能量产生和线粒体呼吸链的影响,进而探讨对能量依赖的P-gp外排泵的作用。 结果 1.在同一色谱条件下,图谱中DEHP. MEHP.内标DNHP及血浆中内源性物质均分离完全,峰形正常。DEHP和MEHP的保留时间分别约为20min和3.4min。内标物DNHP的保留时间为24min,其它杂峰为内源性物质。在所建立的HPLC条件下,血浆中内源性物质不干扰DEHP、MEHP和内标物DNHP的测定,为本课题之后毒代动力学研究打下基础。 2.毒代动力学结果表明联合染毒,吐温80可明显增强DEHP的肠道吸收及生物利用度。 3.吐温80通过时间及浓度依赖性降低线粒体膜电位、耗竭胞内ATP、降低电子传递链活性对Caco-2细胞线粒体功能产生影响。进而使能量依赖的P-gp的外排作用减少,增加邻苯二甲酸酯的吸收。 结论 吐温80能显著增加大鼠DEHP的吸收,提高其体内DEHP及MEHP的生物利用度。其机理可能由于吐温80对小肠上皮细胞中线粒体功能造成损伤、抑制了细胞中能量依赖性的P-gp的外排作用有关。
【关键词】：邻苯二甲酸酯 食品乳化剂 吐温80 毒代动力学 吸收 P糖蛋白 线粒体
【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R333.3
【目录】：

• 缩略语表3-4
• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一部分 文献综述11-27
• 第1章 邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)的研究进展12-17
• 1.1 邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯的毒代动力学与毒性效应12-14
• 1.2 DEHP的吸收,分布和代谢14-15
• 1.2.1 DEHP的吸收14-15
• 1.2.2 DEHP的分布15
• 1.2.3 DEHP的代谢15
• 1.3 DEHP的毒性作用15-17
• 第2章 食品乳化剂对胃肠道功能的影响17-22
• 2.1 食品乳化剂的用途17
• 2.2 食品乳化剂对胃肠道屏障的影响17-20
• 2.2.1 第一层保护：疏水性粘液层17-18
• 2.2.2 跨细胞通道：上皮细胞膜18-19
• 2.2.3 环境毒物有效的防线：P-gp蛋白19
• 2.2.4 细胞旁通道：紧密连接19-20
• 2.3 吐温80的研究进展20-21
• 2.3.1 吐温80的理化性质及应用20
• 2.3.2 吐温80对P-gp的影响20-21
• 2.4 食品乳化剂实际应用及协同效应21-22
• 第3章 P-gp的研究进展22-27
• 3.1 外排性转运体：P-gp22-23
• 3.1.1 P-gp的结构和分布22
• 3.1.2 P-gp的生理功能22-23
• 3.1.3 P-gp与药代及毒代动力学23
• 3.2 P-gp抑制剂的研究概况23-24
• 3.2.1 传统P-gp抑制剂23
• 3.2.2 辅料作为P-gp抑制剂23-24
• 3.3 辅料抑制剂的作用机制24-25
• 3.3.1 改变细胞膜的流动性24
• 3.3.2 抑制P-gp的ATP酶活性24
• 3.3.3 降低细胞内ATP水平24-25
• 3.3.4 下调P-gp的表达25
• 3.3.5 降低细胞膜胆固醇含量25
• 3.4 P-gp与线粒体的研究概况25-27
• 3.4.1 膜电位25-26
• 3.4.2 能量关系26
• 3.4.3 ROS水平26-27
• 第二部分 实验研究27-51
• 第4章 大鼠血浆中DEHP的HPLC检测方法学研究28-35
• 4.1 前言28
• 4.2 实验材料28-29
• 4.2.1 仪器28
• 4.2.2 主要实验试剂28-29
• 4.3 实验方法29-30
• 4.3.1 溶液配制29
• 4.3.2 色谱条件29
• 4.3.3 样品预处理29
• 4.3.4 工作曲线29
• 4.3.5 提取回收率和方法回收率29-30
• 4.4 实验结果30-34
• 4.4.1 方法专属性30-31
• 4.4.2 工作曲线及检测限31-33
• 4.4.3 回收率与精密度33-34
• 4.5 小结34-35
• 第5章 吐温80对DEHP的毒代动力学及生物利用度的影响35-40
• 5.1 前言35-36
• 5.2 实验材料36
• 5.2.1 主要实验试剂36
• 5.2.2 受试动物36
• 5.2.3 实验仪器36
• 5.3 实验方法36-37
• 5.3.1 给药和采样36-37
• 5.3.2 血浆样品处理及测定37
• 5.3.3 药代动力学参数计算37
• 5.3.4 相对生物利用度的计算37
• 5.3.5 数据统计分析37
• 5.4 实验结果37-39
• 5.4.1 专属性实验结果37
• 5.4.2 血药浓度37-38
• 5.4.3 毒代动力学参数38-39
• 5.5 小结39-40
• 第6章 吐温80促进DEHP吸收的机理研究40-51
• 6.1 前言40
• 6.2 实验材料40-41
• 6.2.1 实验试剂40
• 6.2.2 实验仪器40-41
• 6.3 实验方法41-42
• 6.3.1 吐温80对Caco-2细胞株的细胞毒性研究41
• 6.3.2 吐温80对线粒体膜电位影响研究41
• 6.3.3 线粒体呼吸能量功能分析41-42
• 6.3.4 统计学分析42
• 6.4 结果42-47
• 6.4.1 吐温80对Caco-2细胞生存率的影响42-43
• 6.4.2 吐温80对线粒体膜电位影响的研究43-45
• 6.4.3 线粒体呼吸功能分析45-47
• 6.4.4 统计学分析47
• 6.5 讨论47-49
• 6.6 小结49-51
• 结论51-52
• 参考文献52-58
• 在读期间发表的学术论文及研究成果58-59
• 致谢59

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本文编号：649766