内源性DNA加合物方法建立及人群生物监测

发布时间：2017-08-10 12:01

  本文关键词：内源性DNA加合物方法建立及人群生物监测

  更多相关文章： 内源性DNA加合物 生物标志物 UPLC-ESI-MS/MS 苯 生物监测

【摘要】：DNA加合物是一类极其重要的生物标志物，既可以作为接触(暴露)生物标志物，准确反映化学毒物接触的内剂量来评价化学毒物的毒性，为人群生物监测及分析致癌性化学污染物的暴露提供有效的手段，又可以作为效应标志物，筛检高危人群，为生物体的癌症风险评价提供重要信息，同时，可发展合理的癌症预防和治疗策略。在人类组织中绝大多数的突变，可以确定是内源性的。内源性DNA损伤比起外源性发生的频率更高。因此，内源性DNA加合物的检测是毒理学研究的重点，具有重要的应用价值。但内源性DNA加合物在人体中含量很低，这就要求检测方法灵敏度要高、检测限低、特异性要好。长期接触苯诱发再生障碍性贫血和白血病的因果关系已经流行病学的研究证实。本研究以基于队列的横断面研究为基础，通过建立高特异性、高灵敏度和高通量的UPLC-MS-MS检测方法，检测接苯作业工人和非接苯作业工人生物样本（尿、血）中内源性etheno-DNA加合物作为生物标志物，研究苯诱发氧化应急和脂质过氧化“二次打击”导致的DNA氧化损伤与机体抗氧化防御机制之间的关联，揭示苯中毒和致癌新的分子机制，为苯中毒和致癌早期临床诊断和治疗提供理论依据。本文的主要研究内容包括以下两个方面： 1、在本实验室研究基础上，建立和优化了UPLC-ESI-MS/MS检测血中etheno-DNA（εdA，εdC）加合物的方法。本方法灵敏度高，检测限低，回收率好，样品需求量小（20μg），最低可以检测5g DNA。该方法能够用于大样本血中εdA，εdC的定量分析。εdA，εdC的检测限为：1.45fmol，1.27fmol。 2、利用该方法以及本实验室建立的尿中etheno-DNA检测方法，对采集自某鞋厂的接苯作业工人和某电缆厂非接苯作业工人血、尿中etheno-DNA（εdA，εdC）加合物进行了分析检测并进行了综合分析。研究苯诱发氧化应急和脂质过氧化"二次打击"导致的DNA氧化损伤与机体抗氧化防御机制之间的关联，，揭示苯中毒和致癌新的分子机制，为苯中毒和致癌早期临床诊断和治疗提供理论依据。
【关键词】：内源性DNA加合物 生物标志物 UPLC-ESI-MS/MS 苯 生物监测
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3416;O629.74
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目录7-10
• 第一章 绪论10-34
• 1 内源性 DNA 加合物11-13
• 1.1 DNA 氧化损伤11-12
• 1.2 脂质过氧化导致的 DNA 损伤12-13
• 2 内源性 DNA 加合物的种类13-18
• 2.1 Propano-DNA 加合物14
• 2.2 MDA-DNA 加合物14-15
• 2.3 Etheno-DNA 加合物15-18
• 3 Etheno-DNA 加合物检测方法研究进展18-21
• 3.1 32~P 后标记法18-19
• 3.2 免疫分析法19
• 3.3 色谱质谱联用法19-20
• 3.3.1 GC-MS/MS19-20
• 3.3.2 LC-MS/MS20
• 3.4 其它方法20-21
• 4 内源性 DNA 加合物人群生物监测中的应用21-24
• 4.1 慢性炎症21-22
• 4.2 遗传性疾病22
• 4.3 膳食因素22-23
• 4.4 吸烟23
• 4.5 环境污染23-24
• 5 本文的研究目的和意义24-26
• 参考文献26-34
• 第二章 UPLC-ESI-MS/MS 检测血中 Etheno-DNA 加合物34-55
• 1 前言34-35
• 2 实验部分35-46
• 2.1 仪器与试剂35
• 2.2 试剂的配制35-36
• 2.3 标准品的合成36-40
• 2.4 血样 DNA 提取及浓度测定40-41
• 2.4.1 血样 DNA 的提取40-41
• 2.4.2 DNA 浓度的测定41
• 2.5 样品前处理41-45
• 2.5.1 DNA 的酶解41-44
• 2.5.2 纯化44
• 2.5.3 HPLC 富集44-45
• 2.6 UPLC-ESI-MS-MS 检测血中 εdA,εdC 加合物45-46
• 2.6.1 UPLC 条件45
• 2.6.2 质谱条件45-46
• 3 结果与讨论46-53
• 3.1 方法学验证46-53
• 3.1.1 标准曲线与线性范围46-47
• 3.1.2 检出限与定量限47-48
• 3.1.3 精密度试验48-49
• 3.1.4 方法的重现性试验49-50
• 3.1.5 回收率试验50-51
• 3.1.6 样品检测51-53
• 4 小结53-54
• 参考文献54-55
• 第三章 苯职业暴露致 DNA 氧化损伤机制研究---横断面研究55-79
• 1 前言55-56
• 2 研究对象56
• 3 问卷调查56-57
• 4 接苯和不接苯作业工人血中 εdA、εdC 水平检测57-63
• 4.1 UPLC-MS/MS 检测血中 etheno-DNA 加合物方法57
• 4.1.1 标准品的合成、纯化、定量57
• 4.1.2 DNA 样品前处理57
• 4.2 接苯与非接苯女性、男性作业工人血中 εdA、εdC 含量检测57-63
• 5 接苯和不接苯作业工人尿中 εdC、εdA 水平检测63-70
• 5.1 UPLC-MS/MS 检测尿中 etheno-DNA 加合物63-65
• 5.1.1 仪器与试剂63-64
• 5.1.2 试剂的配制64
• 5.1.3 标准品的合成、纯化、定量64
• 5.1.4 尿样前处理64-65
• 5.2 接苯与非接苯女性、男性作业工人血中 εdA、εdC 含量检测65-70
• 6 结果与讨论70-77
• 6.1 接苯和不接苯作业工人的特征70-72
• 6.2 使用不同种类胶工位空气中苯及苯系物的检测结果分析72-73
• 6.3 接苯和不接苯作业工人血中 etheno-DNA 加合物关联性分析73-75
• 6.4 接苯和不接苯作业工人尿中 etheno-DNA 加合物关联性分析75-77
• 7 小结77-78
• 参考文献78-79
• 附件79-81
• 硕士期间发表或待发表的文章81-82
• 致谢82

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 高梅，章娅琳，闻凤霞;苯、苯酚对作业工人健康影响的调查[J];工业卫生与职业病;1995年05期

2 冯峰;王超;吕美玲;汪海林;;DNA加合物检测[J];化学进展;2009年Z1期

3 李欣欣;杨功焕;孙新;;DNA氧化损伤与肿瘤[J];环境与职业医学;2011年05期

4 吕玲;林国为;邹和建;王小钦;Richard D Irons;;苯中毒骨髓损伤的特征[J];中国工业医学杂志;2007年01期

5 陈艳,李桂兰,高耘,纪之莹;慢性苯中毒相关基因cDNA的表达与克隆[J];卫生毒理学杂志;2004年S1期

6 邢彩虹;纪之莹;李桂兰;尹松年;;DNA损伤修复能力与慢性苯中毒关系研究[J];卫生研究;2006年04期

7 张奔;对低浓度苯接触工人健康状况的调查[J];中华预防医学杂志;1996年03期

本文编号：650572