Cx43在PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

发布时间：2017-08-10 15:23

  本文关键词：Cx43在PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

  更多相关文章： VSMCs siRNA Cx43 p-Cx43 ERK1/2 PDGF-BB

【摘要】：目的： 本实验旨在通过Cx43siRNA下调VSMCs Cx43蛋白表达，并用PDGF-BB与ERK1/2特异性阻断剂PD98059处理细胞，探讨Cx43在PDGF-BB诱导的大鼠VSMCs增殖中的作用及信号通路机制。 方法： 1.通过脂质体将Cx43siRNA转染入大鼠胸主动脉VSMCs，使VSMCs低表达Cx43蛋白，检测沉默效率。 2.MTT比色法检测各组VSMCs活性。实验分为6组：①PDGF-BB组；②Cx43siRNA+PDGF-BB组；③Scramble RNA+PDGF-BB组；④PD98059+PDGF-BB组；⑤Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB组；⑥ScrambleRNA+PD98059+PDGF-BB组。下同。 3.流式细胞技术检测各组VSMCs增殖率。 4.Western blot分别检测Cx43，p-Cx43，p-ERK1/2及cyclin E蛋白表达。 结果： 1. Western blot结果显示，，Cx43siRNA组Cx43蛋白表达为对照组的47%，提示Cx43siRNA沉默效果良好（P＜0.01）。 2. MTT比色法显示Cx43siRNA+PDGF-BB组较PDGF-BB组吸光度值显著减小（P＜0.01）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB组较Cx43siRNA+PDGF-BB组吸光度值显著减小（P＜0.05）。 3.流式细胞技术结果显示Cx43siRNA+PDGF-BB组增殖率较PDGF-BB组显著减小（P＜0.01）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB组增殖率较Cx43siRNA+PDGF-BB组显著减小（P＜0.05），提示Cx43低表达，PDGF-BB诱导的VSMCs增殖能力明显下降；ERK1/2通路被阻断后PDGF-BB诱导的VSMCs增殖能力也显著下降。 4. Western blot结果显示： ①Cx43siRNA+PDGF-BB组比PDGF-BB组Cx43蛋白表达显著减少（P＜0.05）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB组比Cx43siRNA+PDGF-BB组Cx43蛋白表达显著减少（P＜0.05），提示Cx43siRNA沉默效果良好，且ERK1/2途径被阻断后，Cx43蛋白表达明显下调。 ②PD98059+PDGF-BB组比PDGF-BB组p-Cx43蛋白表达明显降低（P0.05），提示ERK1/2途径被阻断后，p-Cx43蛋白表达显著下调。 ③Cx43siRNA+PDGF-BB组比PDGF-BB组p-ERK1/2蛋白表达明显减少（P＜0.05）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB组比Cx43siRNA+PDGF-BB组p-ERK1/2蛋白表达显著下降（P＜0.05），提示Cx43蛋白低表达促进了p-ERK1/2蛋白表达水平明显降低。 ④Cx43siRNA+PDGF-BB组比PDGF-BB组cyclin E蛋白表达明显减少（P＜0.01）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB组比Cx43siRNA+PDGF-BB组cyclinE蛋白表达明显下降（P＜0.05），提示Cx43蛋白低表达，促进cyclin E蛋白表达水平明显下调，两者呈正相关；同时阻断ERK1/2通路，cyclin E蛋白表达更低。 结论： 1. RNA干扰特异性沉默Cx43蛋白表达后，能显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖，显著降低p-ERK1/2和cyclin E蛋白表达。 2. PD98059预处理能显著增强Cx43低表达对VSMCs增殖的抑制作用，同时显著降低p-ERK1/2，Cx43，p-Cx43和cyclin E蛋白表达。 3.以上结果提示Cx43蛋白可能通过ERK1/2途径增强PDGF-BB诱导的VSMCs增殖，进而促进As病变过程。
【关键词】：VSMCs siRNA Cx43 p-Cx43 ERK1/2 PDGF-BB
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 实验材料与仪器14-17
• 2.1 实验材料14-16
• 2.1.1 主要购置试剂14-15
• 2.1.2 主要配置溶液15-16
• 2.2 主要仪器设备16-17
• 第3章 实验方法17-25
• 3.1 VSMCs 细胞培养17-18
• 3.1.1 VSMCs 传代培养17
• 3.1.2 VSMCs 冻存17
• 3.1.3 VSMCs 复苏17-18
• 3.2 VSMCs 转染 Cx43 siRNA18
• 3.3 Western blot 检测 Cx43 siRNA 沉默效率18-21
• 3.4 MTT 比色法测定细胞活性21-22
• 3.5 流式细胞技术测定细胞增殖率22-23
• 3.6 Western blot 检测 Cx43，p-Cx43，p-ERK1/2 及 cyclin E 蛋白表达23-24
• 3.7 数据统计学处理24-25
• 第4章 结果25-33
• 4.1 Cx43 siRNA 沉默效率25-26
• 4.2 Cx43 siRNA 转染后各组细胞增殖情况26-28
• 4.2.1 MTT 比色法测定各组细胞活性26-27
• 4.2.2 流式细胞技术测定各组细胞增殖率27-28
• 4.3 各组细胞 Cx43，p-Cx43，p-ERK1/2 及 cyclin E 蛋白表达鉴定28-33
• 第5章 讨论33-37
• 5.1 Cx43 与 VSMCs 增殖33
• 5.2 Cx43 与 ERK1/2 途径33-34
• 5.3 Cx43 磷酸化与 MAPK 途径34-35
• 5.4 Cx43 独立于 GJIC 作用35-36
• 5.5 展望36-37
• 第6章 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-42
• 综述42-50
• 参考文献47-50

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 倪燕;朱莉莉;蒋秀红;丁正年;张国楼;;异氟醚对心肌细胞超微结构及CX43蛋白表达的保护作用[J];齐齐哈尔医学院学报;2010年08期

2 吴其艳;张金英;邓子辉;颜光涛;;瘦素对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及表达Cx43的影响[J];四川大学学报(医学版);2012年03期

3 庄梅;罗红鹤;刘晓冰;陈振光;;缺血预处理对心肌细胞超微结构及CX43蛋白表达的保护作用[J];中山大学学报(医学科学版);2006年05期

4 方鹤莺;吴士尧;;急性病毒性心肌炎与Cx43的相关实验研究[J];实用诊断与治疗杂志;2008年04期

5 李松南;毛晓波;冯义柏;王祥;曾秋棠;毛奕;吉庆伟;彭昱东;郭敏;梁志山;;大鼠Cx43基因慢病毒表达载体的构建及转染骨髓间充质干细胞表达的观察[J];临床心血管病杂志;2010年11期

6 齐清会;代从新;;多器官功能障碍综合症大鼠小肠肌层Cx43和缝隙连接变化以及大承气汤的干预作用[J];微循环学杂志;2011年02期

7 哈献文;cx43基因的抗癌作用[J];中国肿瘤;1998年04期

8 陈萍,黄国英,常才,赵晓晴,谢利剑;Cx43基因在人类及小鼠胎心发育中的时空表达规律[J];中国实验动物学报;2005年01期

9 余炜昶;黄光英;张明敏;张强;王伟;;缝隙连接蛋白Cx43基因在针刺镇痛中的作用[J];中国针灸;2007年03期

10 颜灿群;占克斌;黄光英;王伟;;针刺治疗Cx43基因敲除鼠胶原性关节炎的免疫学研究(英文)[J];World Journal of Acupuncture-Moxibustion;2007年04期

中国重要会议论文全文数据库 前9条

1 徐振平;王学惠;;n急性一氧化碳中毒大鼠心脏间隙连接蛋白Cx43的表达[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年

2 杨霞;江运长;彭清华;;益气活血法对激光损伤兔视网膜后视网膜缝隙连接蛋白Cx43表达影响的研究[A];第六届全国中医中西医结合眼科学术交流会论文汇编[C];2007年

3 许学兵;姚尚龙;佘守章;;鞘内注射MK-801对慢性神经痛大鼠的治疗作用及对脊髓星形胶质细胞Cx43表达的影响[A];中华医学会疼痛学分会第六届年会论文摘要[C];2005年

4 于雪芳;孙跃民;边波;滕天明;王清;聂晶;万征;;阿托伐他汀对自发性高血压大鼠心肌肥厚和Cx43的影响[A];中华医学会第十五次全国心血管病学大会论文汇编[C];2013年

5 陈葵;黄从新;王腾;曹峰;包明威;王海容;曲哲;;卡维地洛对心肌梗死后家兔室性心律失常的影响及与Cx43的关系[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

6 李伏娥;沈守荣;张熙纯;邹益友;李桂源;;人胃癌中Cx43基因点突变和甲基化的研究[A];2008全国消化肿瘤新技术治疗研讨会论文汇编[C];2008年

7 袁勇华;何学华;刘丽萍;;卡维地洛对扩张型心肌病大鼠心肌Cx43表达的影响[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2012年

8 刘雪华;高春锦;葛环;刘福佳;刘洋;赵宏颖;;高压氧对移植皮瓣VEGF、HIF-1及CX43的影响[A];中华医学会第十六次全国高压氧学术会议论文汇编[C];2007年

9 刘如秀;暴美静;王妮娜;李汇搏;;康心复律方对损伤兔窦房结组织Cx40、Cx43、Cx45表达的影响[A];2011年中华中医药学会心病分会学术年会暨北京中医药学会心血管病专业委员会年会论文集[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 李卉;与胚胎心肌共培养通过Cx43影响ESC源细胞间信号传导的研究[D];华中科技大学;2013年

2 史悦;白藜芦醇抑制氧化磷脂诱导的血管平滑肌细胞增殖和Cx43磷酸化的研究[D];南京医科大学;2013年

3 颜灿群;针刺治疗胶原性关节炎Cx43基因敲除鼠的免疫学机理研究[D];华中科技大学;2007年

4 李松南;过表达Cx43的骨髓间充质干细胞移植治疗心梗后心衰的实验研究[D];华中科技大学;2010年

5 司英健;Cx43基因修饰的白血病骨髓基质细胞对Jurkat细胞体外调节作用的研究[D];第三军医大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张凯;低频脉冲磁场对大鼠心肌微血管内皮细胞及Cx43的影响与机制的研究[D];第四军医大学;2013年

2 王买红;Cx43修饰的人脐血源基质细胞对人外周血淋巴细胞调节作用的体外研究[D];第三军医大学;2014年

3 王学惠;急性一氧化碳中毒大鼠心脏缝隙连接蛋白Cx43的表达及超微结构的观察[D];山西医科大学;2005年

4 高一菁;乳腺浸润性导管癌组织中Cx43与E-cad表达的意义及相关性研究[D];南昌大学医学院;2013年

5 陈果;Cx43修饰人脐血源基质细胞对SUP-B15细胞体外调节作用的研究[D];第三军医大学;2014年

6 萨日娜;子宫结合带的超微结构及Cx43表达变化与子宫腺肌病、卵巢子宫内膜异位症发病学的关系[D];内蒙古医学院;2010年

7 程玉;Cx43和PI3K/Akt信号通路在胃癌发生、发展中的作用及其相互关系的研究[D];承德医学院;2014年

8 张权宇;κ-阿片受体通过调节Cx43稳定性介导的抗缺血性心律失常作用机制研究[D];第四军医大学;2010年

9 李真真;黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致心肌梗死的保护作用及Cx43表达的影响[D];兰州大学;2013年

10 江书正;Cx43在PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用[D];南昌大学医学院;2013年

本文编号：651441