Methylcobalamin在背根节慢性压迫大鼠模型上的外周镇痛作用及其机制

发布时间：2017-08-14 19:10

  本文关键词：Methylcobalamin在背根节慢性压迫大鼠模型上的外周镇痛作用及其机制

  更多相关文章： methylcobalamin 神经病理性痛 DRG 自发放电 触诱发痛 兴奋性 I_h电流

【摘要】：背根节慢性压迫（chronic compression of dorsal root ganglion, CCD）神经病理性痛模型能有效的模拟腰椎间盘突出，椎管狭窄和肿瘤压迫等原因造成的临床上常见的腰背痛和坐骨神经痛。CCD大鼠模型背根节神经元膜上离子通道表达和功能改变导致其兴奋性的变化，背根节（dorsal root ganglion, DRG）有自发放电（spontaneousactivity）出现。由于外周传入冲动的增加，造成脊髓和高位中枢的持续性兴奋和敏化，导致神经病理性痛症状的出现。损伤感觉神经元胞体或轴突产生的自发放电是疼痛产生和维持的重要基础，异位自发放电成为评价和研究镇痛药物及其机制的一种手段。 最近的研究发现methylcobalamin (MeCbl)能够改善非特异性腰痛患者的疼痛评分，有报道指出B12单独使用或者与B1，B6联合其使用有助于缓解SNL的触诱发痛，，SCI和CCD模型的热痛觉敏化。但是也有研究报道MeCbl不能改善腰椎椎管狭窄患者的疼痛症状。因此，对于MeCbl是否具有镇痛作用仍存在争议。MeCbl是否影响初级感觉神经元的自发放电和兴奋性尚不明确。本实验在CCD模型上，研究MeCbl对神经病理性痛的作用及其机制。 超极化激活的内向流（Hyperpolarization-activated inward currents，I_h）存在于DRG神经元中。通过抑制神经元超极化和促进去极化调节细胞膜的兴奋性。以往研究显示DRG慢性压迫的感觉神经元I_h电流密度增加，然而，MeCbl是否影响DRG神经元I_h电流密度未见报道。 主要结果 1. CCD大鼠表现双侧后足触诱发痛和损伤侧热痛觉敏化 术后21d内观察并测定CCD组和sham组双侧机械缩足阈值和热缩足潜伏期（TWL）。与sham组相比较，CCD组双侧机械缩足阈值显著下降（损伤侧：P0.001；对侧：P0.001，重复测量方差分析）。损伤侧CCD组TWL较sham组明显下降而对侧不存在差异（损伤侧：P0.001；对侧：P0.05，重复测量方差分析）。 2.连续腹腔注射MeCbl明显抑制CCD大鼠的触诱发痛，对TWL无影响。 观察长时程和短时程腹腔注射MeCbl对CCD大鼠的触诱发痛和TWL的影响。数据显示单次注射MeCbl在短时程不对CCD和sham组双侧机械缩足阈值和TWL产生作用(P=1.00,重复测量方差分析)。长时程中，在双侧，均是5d,10d,18d,23d和28d5个点存在差异(损伤侧：P0.05；对侧：P0.01,重复测量方差分析)。长时程腹腔注射MeCbl（2.5mg/kg）在第5天开始出现抑制CCD大鼠双侧触诱发痛的作用，并且有时间累积效应。虽然CCD手术前后大鼠的TWL没有显著降低，在长时程的观察中，CCD大鼠的TWL维持稳定，说明长时程腹腔注射MeCbl不影响CCD大鼠双侧TWL。 3. MeCbl明显抑制CCD DRG A-类神经元的自发放电 在62例单纤维中，66.1%对MeCbl敏感，其中83.3%的单位能在10min内洗脱恢复至基线水平，浓度从3至300μM表现剂量依赖效应。MeCbl（300μmol/L）对CCD A-类DRG神经元周期和非周期放电模式的自发放电均有抑制作用，两者之间不存在差异。利用全细胞膜片钳技术研究MeCbl对CCD大鼠离体中型DRG神经元自发放电的影响，发现在60s内，细胞的自发放电被完全抑制，并且洗脱10min内恢复。 4. MeCbl明显抑制CCD中型DRG细胞的兴奋性 与sham组相比，CCD大鼠中型DRG神经元AP的幅值和最大上斜率都明显增大(P0.05，n=32，单因素方差分析)。而MeCbl显著降低CCD中型DRG神经元的兴奋性，表现AP幅值、AHP幅值、最大上升斜率和最大下降斜率明显下降(P0.01,n=34,配对t检验)；半宽显著增大(P0.05, n=34,配对t检验)。 5. MeCbl明显减小CCD DRG中型DRG细胞的I_h电流密度 CCD组的超极化激活的I_h电流密度较sham组显著升高(P0.05，重复测量方差分析)。MeCbl作用于CCD和sham组DRG，明显降低CCD组中型DRG细胞I_h电流密度而不影响sham组(P0.05,重复测量方差分析)。 主要结论： 1.长时程腹腔注射MeCbl可明显抑制CCD大鼠双侧触诱发痛，不影响CCD大鼠双侧TWL；对sham大鼠机械阈值无影响。 2. MeCbl明显抑制在体、离体CCD DRG A-类神经元的SA。MeCbl（300μmol/L）对在体A-类神经元的SA抑制作用与放电模式无关。 3. MeCbl明显降低CCD中型DRG神经元的兴奋性，明显降低AP幅值、AHP幅值、最大上升斜率和最大下降斜率；明显增大半宽。 4. MeCbl显著降低CCD中型DRG神经元I_h电流密度。
【关键词】：methylcobalamin 神经病理性痛 DRG 自发放电 触诱发痛 兴奋性 I_h电流
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R745.4
【目录】：

• 缩略语表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 文献回顾16-23
• 第一部分 Methylcobalamin 对背根节慢性压迫模型痛行为的作用23-37
• 1 实验材料23-24
• 1.1 实验动物23
• 1.2 实验药品23
• 1.3 实验器材23-24
• 2 实验方法24-26
• 2.1 背根节慢性压迫大鼠模型的制备24-25
• 2.2 机械性触诱发痛的测定25
• 2.3 热痛缩足潜伏期的测定25
• 2.4 实验动物的给药方法25-26
• 3 数据处理26
• 4 结果26-34
• 4.1 CCD 大鼠的机械触诱发痛和热痛觉过敏26-28
• 4.2 短时程腹腔注射 MeCbl 不影响 CCD 大鼠的机械触诱发痛和 TWL28-31
• 4.3 长时程腹腔注射 MeCbl 对 CCD 大鼠机械触诱发痛和 TWL 的影响31-34
• 5 讨论34-37
• 第二部分 Methylcobalamin 对损伤 DRGA-类神经元自发放电的影响37-46
• 1 实验材料37-38
• 1.1 实验动物37
• 1.2 实验药品和试剂37
• 1.3 实验仪器37-38
• 1.4 实验溶液的配置38
• 2 实验方法38-39
• 2.1 CCD 大鼠模型的制备38
• 2.2 DRG A-类神经元自发放电的引导38-39
• 3 数据处理39-40
• 4 结果40-44
• 4.1 损伤 DRG A-类神经元的异位自发放电40
• 4.2 MeCbl 对损伤 DRG A-类神经元自发放电的抑制作用40-41
• 4.3 MeCbl 对损伤 DRG A-类神经元不同模式自发放电的抑制作用41-44
• 5 讨论44-46
• 第三部分 Methylcobalamin 对中型 DRG 神经元兴奋性和 I_h的影响46-59
• 1 材料46-48
• 1.1 实验动物46
• 1.2 实验药品和试剂46-47
• 1.3 实验溶液配制47
• 1.4 实验器材47-48
• 2 实验方法48-49
• 2.1 背根节标本的制备48
• 2.2 全细胞记录方法48-49
• 3 数据收集和统计分析49
• 4 实验结果49-55
• 4.1 MeCbl 抑制 CCD 模型中型 DRG 神经元的兴奋性49-54
• 4.2 CCD 中型 DRG 神经元的 I_h电流密度显著提高54
• 4.3 MeCbl 降低 CCD 中型 DRG 神经元的 I_h电流密度54-55
• 5 讨论55-59
• 小结59-60
• 参考文献60-71
• 个人简历和研究成果71-72
• 致谢72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 朱旭萍,周智广;PGE1加甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变[J];湖南医科大学学报;2001年04期

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3 谢雅彬;张天蔚;焦西英;解柔刚;胡三觉;游思维;徐晖;;多节段背根节慢性压迫大鼠机械触刺激诱发痛镜像痛的外周机制[J];神经解剖学杂志;2011年04期

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本文编号：674239