金黄色葡萄球菌多药外排蛋白QacA的功能分析

发布时间：2017-08-15 04:28

  本文关键词：金黄色葡萄球菌多药外排蛋白QacA的功能分析

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【摘要】：目的：评价金黄色葡萄球菌多药耐药主动外排蛋白QacAα-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸对于底物转运的重要性。 方法：1.采用半胱氨酸定点诱变的方法诱变QacA蛋白α-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸I2(异亮氨基酸)，S3(丝氨酸)，F4(苯丙氨酸)，F5(苯丙氨酸)，T6(苏氨酸)，K7(赖氨酸)，D10(天冬氨酸)，M11(蛋氨酸)，R17(精氨酸)，W18(色氨酸)，T19(苏氨酸)，A20(丙氨酸)， V21(缬氨酸)，V22(缬氨酸)，V23(缬氨酸)，，F29(苯丙氨酸)， D34(天冬氨酸)，P43(脯氨酸)，E48(谷氨酸)，E50(谷氨酸)，P51(脯氨酸)，将诱变质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，提取的诱变株质粒通过BamHI酶和EcoRI酶筛选和基因测序验证。2.通过琼脂平板稀释法测定诱变株最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并采用荧光运输试验检测诱变株运输活性。3.Western Blot验证各诱变株均表达QacA蛋白，并比较其表达量。 结果：1.成功半胱氨酸定点诱变22个氨基酸，获得22株诱变菌株。2.MIC和MBC结果分析提示获得的诱变菌株S3C，T6C，R17C，T19C，A20C，F29C，E50C对所测药物完全恢复敏感性，F4C,F5C,P51C对所测药物耐药性明显降低，I2C，K7C，D10C，M11C，W18C，V21C，V22C，V23C，D34C，P43C，E48C和Q55C与QacA WT（pBluescriptII SK(+)/qacA）菌株结果近似。运输试验结果与MIC、MBC结果一致，提示S3C，F4C，F5C，T6C，R17C，T19C，A20C，F29C，E50C，P51C诱变菌株失去对底物的转运能力。3.Western Blot提示S3C，F4C，F5C，T6C，R17C，T19C，A20C，F29C，E50C，P51C诱变菌株的QacA蛋白表达量与QacAWT菌株比较无明显差异。 结论：QacA蛋白α-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸S3，F4，F5，T6，R17，T19，A20，F29，E50，P51可能与QacA蛋白一价和二价阳离子底物的结合和转运功能密切相关。
【关键词】：金黄色葡萄球菌 多药外排蛋白QacA TMS α-螺旋 半胱氨酸定点诱变
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.11
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 1 材料13-18
• 2 方法18-27
• 3 结果27-32
• 4 讨论32-35
• 全文总结35-36
• 参考文献36-40
• 文献综述40-49
• 参考文献44-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表的论文50-51
• 攻读硕士学位期间参加的学习和会议51-52

【共引文献】

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1 丁丽丽;于湘友;姚华;;金黄色葡萄球菌对抗菌药物与消毒剂的交叉耐药研究进展[J];中华医院感染学杂志;2013年20期

本文编号：676274