IMP-38重组蛋白纯化、遗传环境及产IMP-38菌株毒力基因研究

发布时间：2017-08-15 11:12

  本文关键词：IMP-38重组蛋白纯化、遗传环境及产IMP-38菌株毒力基因研究

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【摘要】：目的(1)获得并纯化金属酶新亚型IMP-38重组蛋白。(2)探讨IMP-38基因的遗传环境。(3)了解产IMP-38肺炎克雷伯菌菌株毒力基因分布。方法(1)构建PUC19/IMP-38重组质粒验证IMP-38基因序列。(2)构建原核表达载体pet-28a+/IMP-38,对目的基因诱导表达、纯化及复性。(3)提取9株产IMP-38菌株基因组DNA,采用普通PCR、长片段PCR和重叠延伸PCR探讨IMP-38基因与整合子、转座子关系。(4)提取9株产IMP-38菌株基因组DNA,PCR检测7种荚膜血清型基因和25种毒力基因。结果(1)成功构建PUC19/IMP-38重组质粒,证明前期测序结果完全正确,确定本研究IMP基因为IMP新亚型-IMP-38。(2)成功构建原核表达载体pet-28a+/IMP-38,目的基因大量表达且获得纯度较高的重组蛋白。(3)IMP-38基因位于Ⅰ类整合子上,后者位于转座子Tn402-like上。产IMP-38菌株上携带mer1696操纵子、Tn5051转座子,且存在tnp513、IS26、tnpU和IS5075等遗传标记。(4)9株产IMP-38肺炎克雷伯菌中发现了4株产9种毒力基因菌株,分别为fimH1、mrkD、ycfm、kpn、entB、irp-2、uge、wabG和are A,未发现其他毒力基因和上述荚膜血清型基因。结论(1)本研究IMP基因为IMP新亚型-IMP-38。(2)成功构建原核表达载体pet-28a+/IMP-38,获得纯化的重组蛋白。(3)IMP-38基因位于Ⅰ类整合子上,后者位于Tn402-like转座子上,产IMP-38菌株还存在其他类型转座子和插入序列。(4)同一克隆型细菌携带的毒力基因并不相同,检测毒力基因十分必要。图18幅,表3个,参考文献81篇。
【关键词】：IMP-38基因 重组蛋白 遗传环境 毒力基因
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 缩略词表9-10
• 1 绪论10-12
• 2 新型碳青霉烯酶IMP-38重组蛋白原核表达及纯化12-33
• 2.1 材料12-14
• 2.1.1 细菌菌种与质粒载体12
• 2.1.2 主要试剂12-14
• 2.1.3 主要仪器14
• 2.2 方法14-24
• 2.2.1 构建IMP-38/PUC19重组质粒验证IMP-38基因序列14-19
• 2.2.2 原核表达载体的构建及鉴定19-21
• 2.2.3 目的基因表达、纯化及复性21-24
• 2.3 结果24-31
• 2.3.1 构建IMP-38/PUC19重组质粒验证IMP-38基因序列24-25
• 2.3.2 原核表达载体的成功构建25-26
• 2.3.3 目的基因表达、纯化及复性26-31
• 2.4 讨论31-33
• 2.4.1 构建IMP-38/PUC19重组质粒验证IMP-38基因序列31
• 2.4.2 原核表达载体的构建及鉴定31
• 2.4.3 目的基因表达、纯化及复性31-33
• 3 IMP-38基因遗传环境研究33-44
• 3.1 材料33
• 3.1.1 细菌菌种33
• 3.1.2 主要试剂33
• 3.1.3 主要仪器33
• 3.2 方法33-38
• 3.2.1 IMP-38基因与整合子关系探讨33-35
• 3.2.2 IMP-38基因与转座子关系探讨35-38
• 3.3 结果38-42
• 3.3.1 IMP-38基因与整合子关系38-39
• 3.3.2 IMP-38基因与转座子关系探讨39-42
• 3.4 讨论42-44
• 3.4.1 IMP-38基因与整合子关系探讨42
• 3.4.2 IMP-38基因与转座子关系探讨42-44
• 4 产IMP-38肺炎克雷伯菌毒力因子研究44-50
• 4.1 材料44
• 4.1.1 细菌菌种44
• 4.1.2 主要试剂44
• 4.1.3 主要仪器44
• 4.2 方法44-47
• 4.2.1 荚膜血清型基因检测44-46
• 4.2.2 毒力基因检测46-47
• 4.3 结果47-48
• 4.3.1 荚膜血清型检测结果47
• 4.3.2 毒力基因检测结果47-48
• 4.4 讨论48-50
• 4.4.1 荚膜血清型基因检测48
• 4.4.2 毒力基因检测48-50
• 5 结论50-51
• 参考文献51-57
• 综述57-73
• 参考文献69-73
• 攻读学位期间主要的研究成果73-74
• 致谢74

【参考文献】

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1 解庭波;;大肠杆菌表达系统的研究进展[J];长江大学学报(自科版)医学卷;2008年03期

2 汪雅萍;杨俊;应春妹;杜坤;张灏e，

本文编号：677824