RNA干扰抑制Beclin1基因对裸鼹鼠成纤维细胞增殖与凋亡的影响

发布时间：2017-08-15 12:02

  本文关键词：RNA干扰抑制Beclin1基因对裸鼹鼠成纤维细胞增殖与凋亡的影响

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【摘要】：目的应用RNA干扰技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响以及p53、BAX、Bcl2等基因表达的影响。方法分别检测裸鼹鼠成纤维细胞经饥饿、H_2O_2刺激等处理后Beclin 1的表达,然后采用设计的Beclin l基因的干扰RNA及阴性对照分别瞬时转染裸鼹鼠成纤维细胞。采用real-time PCR及Western blot法检测沉默效果后,采用CCK-1实验检测沉默后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,然后采用Western blot检测相关基因蛋白表达水平。结果饥饿与H_2O_2刺激均能导致Beclin 1表达水平的改变。采用gene expresso转染试剂对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞转染效率可达到90%以上,real-time PCR及Western blot结果显示所设计的Beclin 1 siRNA可有效降低Beclin 1的表达。Beclin 1基因沉默后,裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖抑制率均显著高于对照组,细胞早期凋亡与晚期凋亡率均显著升高,同时p53、BAX、Bcl2、LC3B、p-AKT、m TOR等表达量下降。结论 Beclin 1在裸鼹鼠成纤维细胞抵抗饥饿、H_2O_2刺激等过程中表达量显著变化,同时抑制Beclin 1的表达,可抑制裸鼹鼠细胞增殖,促进其凋亡,这提示Beclin 1基因对裸鼹鼠自噬、增殖、凋亡起到调控作用。
【作者单位】： 第二军医大学实验动物中心;
【关键词】： 裸鼹鼠 成纤维细胞 Beclin RNA干扰 增殖 凋亡
【基金】：国家科技支撑计划(No.2015BAI09B02) 国家自然科学基金(No.31402028) 上海市卫计委课题(No.20144Y0205)联合资助
【分类号】：R-33
【正文快照】： ,(Laboratory Animal Center of the Second Military Medical University,Shanghai 200433,China)bition of Beclin 1 gene expression can inhibit cell proliferation and induce apoptosis.Therefore,Beclin1 gene may play aregulatory role in autophagy,proliferation

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本文编号：678030